沙门菌是一种重要的人兽共患病原菌,不仅可以感染畜禽,而且还可以感染人类。鸡白痢沙门菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌等血清型的沙门菌感染鸡后可以引起鸡沙门菌病,导致鸡的隐性带菌感染,甚至引起鸡的死亡,给养禽业带来巨大的经济损失。同时,沙门菌也是食源性致病菌之一,食用被沙门菌感染或污染的畜禽产品可能导致人类患上沙门菌病,出现腹泻、呕吐、败血症等症状,严重危害人类的健康。因此,必须建立有效的沙门菌检测方法,以控制沙门菌在鸡中的传播。通过检测鸡血清中的沙门菌抗体含量是判定沙门菌感染的重要方法之一。长期以来,在鸡的养殖环节中,玻板凝集试验常常被用来检测鸡血清中的沙门菌抗体,但是该方法敏感性低,易导致沙门菌抗体的漏检。传统的玻板凝集试验不能满足鸡沙门菌抗体的高效、全面检出,因此,发展一种新型的鸡沙门菌抗体检测方法显得十分必要。沙门菌SpiC蛋白是广泛存在于沙门菌中的保守蛋白,具有作为检测沙门菌感染的靶抗原的潜力。本研究建立了基于沙门菌SpiC蛋白的间接ELISA检测方法,并对其进行了初步应用。利用IPTG诱导重组菌Ecoli BL21(DE3)(pET-spiC)表达His-SpiC蛋白,并通过亲和层析纯化方法纯化His-SpiC蛋白。SDS-PAGE鉴定结果显示在20kDa处有明显的目的条带,与预期大小相符,表明His-SpiC蛋白获得正确表达,且纯度较高。通过不同血清型沙门菌感染小鼠的实验,证明SpiC蛋白作为检测抗原可以广谱的检测血清中的沙门菌抗体。以纯化的His-SpiC蛋白为包被抗原,建立检测鸡沙门菌抗体的间接ELISA方法,并对His-SpiC蛋白的包被浓度、包被液、封闭液、封闭时间、血清稀释度及反应时间、二抗浓度及反应时间等条件进行优化。结果显示,基于沙门菌SpiC蛋白间接ELISA方法的最适实验条件为:以CBS作为包被液,将His-SpiC蛋白稀释至2 μg/ml进行包被,包被条件为37℃,2h;5%skim milk作为最适封闭液,37℃封闭2h;血清用2%%BS以1:640进行稀释,37℃孵育2h;酶标二抗以1:30000进行稀释,37℃孵育45min;TMB显色孵育5 min;加入1M H2S04终止反应,并于OD450处读数。用以上实验程序测定48份SPF鸡血清,经计算得出cut-off值为0.26,即OD450≥0.26的血清判定为沙门菌阳性血清。以经由Biochek公司沙门菌B群和D群抗体检测试剂盒检测结果均为阴性的禽法氏囊、禽流感、鸡新城疫、禽白血病、鸡变形杆菌病、大肠杆菌病等鸡阳性血清、鸡白痢沙门菌阳性血清、SPF鸡血清,评价所建立的间接ELISA的特异性。结果显示,除沙门菌阳性血清以外的其它6种鸡血清的检测结果均为阴性,表明本研究所建立的间接ELISA方法特异性高,与其它禽病抗体无交叉反应。通过批内试验和批间试验评价所建立的间接ELISA检测方法的重复性。结果显示批内试验和批间试验的变异系数均在15%以内,表明所建立的鸡沙门菌抗体间接ELISA检测方法重复性好。以鸡白痢沙门菌口服感染鸡为模型,分别利用建立的间接ELISA检测方法和玻板凝集试验检测鸡血清中的沙门菌抗体。结果显示,本研究所建立的间接ELISA检测方法在沙门菌感染9天后可以检测出鸡血清中沙门菌抗体,而玻板凝集试验则在沙门菌感染15天后才可检测到沙门菌抗体,表明本研究所建立的ELISA检测方法可以更早地检测出鸡血清中的沙门菌抗体,也间接显示了该ELISA检测方法具有更高的敏感性。通过鸡感染沙门菌后血清中SpiC蛋白抗体产生规律的测定结果,表明鸡在感染沙门菌后产生的SpiC蛋白抗体在感染后第9天即能检出,并一直持续且稳定的存在于血清中至少超过3个月。同时以本研究所建立的间接ELISA检测方法与商品化沙门菌B群和D群抗体测试剂盒检测相同的血清样品,结果显示这两种方法的阳性符合率为100%,阴性符合率为94.3%,表明本研究所建立的沙门菌抗体间接ELISA检测方法可以有效的检测鸡血清中的沙门菌抗体,且该间接ELISA方法的敏感性高于商品化试剂盒。利用本研究所建立的间接ELISA检测方法分别检测鸡白痢沙门菌S06004、以及减毒活疫苗S06004△spiC和S06004△spiC△rfbL感染后的鸡血清中的沙门菌抗体,结果显示S06004△spiC和S06004△spiC△rfbL感染后的鸡血清中的沙门菌抗体均为阴性,表明本研究建立的间接ELISA检测方法具有区分spiC基因缺失疫苗免疫动物和自然感染动物的潜力。利用本研究所建立的间接ELISA检测方法对分别地处扬州、河北和南通的三个鸡场采集的血清样品进行血清流行病学调查,结果发现南通某鸡场的阳性率为三者中最高,其次为河北某鸡场,而扬州某鸡场血清中沙门菌抗体检测的阳性率最低。表明该方法可以很好的用于临床血清样本的检测,为鸡血清中沙门抗体的检测提供了一种高效可靠且广谱的检测方法。