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背景:内分泌治疗可显著改善激素受体阳性乳腺癌患者的预后。然而在乳腺癌的内分泌治疗中仍有将近50%的乳腺癌患者最终将发展为内分泌治疗的耐药,乳腺癌发生内分泌治疗的耐药机制目前仍然不明确。研究表明FAM64A(Family with Sequence Similarity 64,Member A)在多种肿瘤组织中较正常组织表达上调,FAM64A高表达是患者不良预后指标。查询乳腺癌的癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中的基因表达谱数据动态分析(Gene Expression Profilling Interactive Analysis,GEPIA)数据库可见FAM64A在不同类型乳腺癌中表达水平有差异,且与雌激素受体α(estrogen receptor 1,ESR1)的表达呈负相关,推测FAM64A可能与乳腺癌患者内分泌耐药相关。目的:通过检测FAM64A在不同类型乳腺癌细胞及组织中的表达水平,分析FAM64A在不同类型乳腺癌发生发展中的作用。通过细胞学实验及小鼠动物实验探讨FAM64A在对乳腺癌生物学行为及对他莫昔芬(tamoxifen,TAM)药物敏感性的影响,并试图阐明FAM64A诱导乳腺癌发生内分泌耐药的分子机制。方法:1.通过在线数据库分析不同类型乳腺癌组织中FAM64A表达水平差异,分析FAM64A表达水平在不同乳腺癌组织对预后的影响;2.通过蛋白质免疫印迹法(Western Blotting,WB)检测不同类型的乳腺癌细胞系中FAM64A蛋白质的表达水平,分析FAM64A表达水平与ERα表达水平的关系;3.通过外源性转染及FAM64A质粒使乳腺癌细胞过表达FAM64A基因,通过外源性转染FAM64A的siRNA(small interferening RNA)或慢病毒包装小发卡RNA(small hairpin RNA,shRNA)沉默内源性FAM64A表达,通过MTT实验(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide)、克隆形成实验和细胞周期实验观察FAM64A对乳腺癌细胞增殖能力的影响,通过Transwell实验、划痕实验、F-actin实验观察FAM64A对乳腺癌细胞迁移运动能力的影响,通过免疫组织化学染色(Immunohistochemistry,IHC)的方法比较FAM64A对上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymaltransition,EMT)指标的作用,比较FAM64A表达水平与ERα表达水平的关系;4.通过MTT实验、平板克隆及小鼠动物实验检测ER阳性乳腺癌细胞过表达FAM64A后对TAM的药物敏感性;5.通过免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)实验检测FAM64A与TWIST1(twist family bHLH transcription factor 1)的结合作用及推测其结合位点;6.通过染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)实验及荧光素酶报告实验检测FAM64A与ER第7内含子及启动子的结合作用,通过IP实验检测FAM64A与Mi2/核小体重塑和去乙酰化酶复合体(Mi2/nucleosomeremodeling and deacetylase,Mi2/NuRD)的结合作用。结果:1.FAM64A在激素受体阴性的乳腺癌组织及细胞系中表达量较高,另外FAM64A与相关的Basal标志物表皮生长因子受体(Epidermal Growth FactorReceptor,EGFR)呈正相关,FAM64A与的Luminal表型相关的标志物ESR1及FOXA1呈负相关(P<0.01);在ER阳性的患者中FAM64A可显著影响其无病生存(disease free survival,DFS)及总生存(overall survival,OS);在ER阴性患者中FAM64A对DFS及OS无显著作用;2.FAM64A在恶性程度较高的乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-468和BT549中高表达,在恶性程度较低的乳腺癌细胞MCF7和T47D中低表达;3.在MDA-MB-231、SK-BR-3细胞中过表达FAM64A能促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力;4.小鼠动物实验中FAM64A能促进乳腺癌细胞的生长,IHC可见FAM64A过表达组的Ki-67、Vimentin、TWIST1指标表达水平上调,E-cadherin、ER表达水平下调。5.在MCF7乳腺癌细胞中过表达FAM64A上调EGFR的表达水平,能下调ER及FOXA1蛋白的表达水平。临床标本中,FAM64A表达水平与ER表达水平呈负相关;6.在293FT细胞中,IP实验结果显示FAM64A可与TWIST1发生结合作用;ChIP实验及荧光素酶报告实验检测FAM64A与ER第7内含子及启动子的结合作用,通过IP实验显示FAM64A可与Mi2/NuRD复合体发生结合作用。结论:1.FAM64A与ER表达呈负相关,FAM64A表达上调是乳腺癌患者预后不良指标,FAM64A表达上调后对内分泌药物敏感性下降;2.FAM64A可与TWIST1发生靶向结合作用;3.FAM64A可通过募集Mi2/NuRD复合体抑制了ER的转录,进而诱导乳腺癌的内分泌耐药的发生。