目的:宫颈癌是全世界妇女第四常见癌症,化疗是目前主要的治疗方法之一,砷剂在实体瘤化疗中广泛运用。GCLC作为GSH合成限速酶亚基可能是砷剂诱导细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用的重要靶点,NF-κB参与调控细胞凋亡,具有调节GCLC的功能,miR-21在宫颈癌发生发展中具有重要作用,其可以通过调控ROS水平参与调节细胞凋亡,NaAsO2通过激活NF-κB活化miR-21。然而,NF-κB/miR-21能否通过GCLC影响GSH合成,参与NaAsO2介导氧化应激致宫颈癌细胞凋亡的过程,目前鲜有报道。因此本次研究目的是探讨NF-κB/miR-21在NaAsO2通过GCLC致Hela细胞凋亡中的作用,为探索砷剂治疗宫颈癌的可能机制提供理论依据。方法:本次研究采用Hela细胞系作为研究对象,施加不同浓度亚砷酸钠（Arsenite,NaAsO2）（0、5、10、15、20、25μmol/L）干预细胞,随后利用GCLC抑制剂丁硫氨酸亚砜亚胺（D,L-Buthionine-（SR）-sulfoximine,BSO）、NF-κB抑制剂BAY 11-7082、miR-21 Inhibitor联合NaAsO2开展干预实验。分别使用Annexin-FITC/PI法、透射电镜、JC-1染料、试剂盒、CCK-8法等方法分析细胞凋亡水平、线粒体的结构及膜电位变化、谷胱甘肽、谷氨酸、半胱氨酸以及活性氧、细胞活性等的变化,通过Western Blot、q RT-PCR、细胞免疫荧光等方法检测BAX、Caspase3、Cleaved-caspase3、Bcl-2、NF-κB p65、p-p65、IκBα、p-IκBα、miR-21、谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基（Glutamate-cysteine ligase catalytic Subunit,GCLC）、谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基（Glutamate-cysteine ligase Modifier Subunit,GCLM）等蛋白、m RNA表达水平。检测指标均以均数±标准差的形式进行描述,利用ANOVA、Dunnett-t法、独立样本t检验等统计方法对实验结果的差异性进行统计学分析。假设检验采用双侧检验,当P＜0.05时,差异认为有统计学意义。结果:1.NaAsO2对Hela细胞凋亡的影响与对照组比较,当使用15、20、25μmol/L Na Aa O2干预时,细胞活性降低（P＜0.05）,细胞凋亡率增加（P＜0.05）,当使用15μmol/L NaAsO2干预细胞24、48、72 h时,细胞活性明显降低（P＜0.05）。2.NaAsO2对Hela细胞线粒体途径凋亡的影响当15、25μmol/L Na Aa O2干预时,细胞线粒体膜外部出现断裂,内部膜与嵴连接中断,线粒体膜电位ΔΨm明显降低（P＜0.05）,细胞内Bcl-2/BAX比值降低（P＜0.05）,Caspase3、Cleaved-caspase3的蛋白表达量增加（P＜0.05）。3.NaAsO2对Hela细胞氧化应激水平的影响当使用15、20、25μmol/L NaAsO2干预细胞24 h时,细胞内ROS水平较对照组增多（P＜0.05）,GSH水平降低（P＜0.05）。当使用15μmol/L NaAsO2干预细胞24、48、72 h时,与0 h组比较,细胞内GSH水平降低（P＜0.05）。4.NaAsO2对Hela细胞内谷胱甘肽合成的影响与对照组比较,15、20、25μmol/L的NaAsO2干预后,细胞内Cys含量、γ-GCS酶活性,γ-GCS酶亚基GCLC、GCLM m RNA的水平与对照组比较均降低（P＜0.05）,GCLC蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。5.GCLC在NaAsO2通过抑制GSH合成致线粒体途径凋亡中的作用当单独使用D,L-Buthionine-（SR）-sulfoximine、15μmol/L NaAsO2干预后,细胞内GCLC蛋白水平、GSH含量较对照组减少（P＜0.05）,细胞内ROS蓄积（P＜0.05）。线粒体膜电位ΔΨm水平及细胞内Bcl-2/BAX比值下调（P＜0.05）,Caspase3与Cleaved-caspase3蛋白表达被提高（P＜0.05）。当两者联合使用时,与15μmol/L NaAsO2组比较,GCLC蛋白及GSH含量减少（P＜0.05）,并且ROS水平增加（P＜0.05）。线粒体膜电位ΔΨm水平及细胞内Bcl-2蛋白与BAX蛋白之间的比值下降,Caspase3、Cleaved-caspase3表达增加（P＜0.05）,并且细胞活性降低（P＜0.05）。6.NaAsO2对Hela细胞内NF-κB信号通路的影响与对照组比较,15、25μmol/L组细胞内IκBαm RNA表达水平增加（P＜0.05）,25μmol/L组细胞内p65 m RNA表达水平增加（P＜0.05）。15、20、25μmol/L NaAsO2干预时,与对照组比较,细胞内IKKβ、p-p65/p65、p-IκBα/IκBα蛋白表达增加（P＜0.05）,细胞核内p65蛋白水平提高（P＜0.05）。7.NF-κB在NaAsO2通过抑制GCLC表达致Hela细胞线粒体途径凋亡中的作用当使用15μmol/L BAY 11-7082干预细胞时,细胞内GCLC m RNA、蛋白表达水平增加（P＜0.05）。NaAsO2联合使用BAY 11-7082后,与NaAsO2单独处理组比较,p65、IκBαm RNA表达降低（P＜0.05）,p-p65/p65、p-IκBα/IκBα、细胞核内p65蛋白表达降低（P＜0.05）,GCLC蛋白及GCLC、GCLM m RNA增加（P＜0.05）。此外,GSH水平被提高,ROS水平降低,线粒体膜电位ΔΨm水平升高、细胞活性提高（P＜0.05）。8.miR-21在NaAsO2通过NF-κB/GCLC致Hela细胞线粒体途径凋亡中的作用当使用15、20、25μmol/L NaAsO2干预细胞24 h时,与对照组比较,细胞内miR-21的表达增加（P＜0.05）。使用BAY 11-7082与NaAsO2联合使用后,与NaAsO2单独组比较,miR-21表达水平降低（P＜0.05）。使用miR-21 Inhibitor抑制NaAsO2激活miR-21后,与NaAsO2和miR-21 NC联用组比较,细胞内GCLC蛋白表达水平和GSH含量增高（P＜0.05）,ROS水平减少（P＜0.05）,线粒体膜电位ΔΨm水平及细胞活性被提高（P＜0.05）。结论:NaAsO2可能下调GCLC表达抑制GSH合成进而触发Hela细胞线粒体途径凋亡,这可能与NaAsO2激活NF-κB信号通路诱导miR-21表达增加致GCLC表达降低,诱发线粒体结构受损、膜电位降低有关。