目的：癫痫(EP)是由脑细胞异常放电引起的短暂性脑功能紊乱。癫痫患者由于长期反复痫性发作，尤其是长时间全面一强直阵挛发作时，脑细胞严重缺氧。随病程的延长，发作次数的增加，大脑神经元，尤其海马神经元，可发生变性，甚至死亡。患者逐渐出现脑功能受损症状，如记忆力减退，学习能力下降等多种认知功能障碍，严重影响患者的生存质量，部分患者病情迁延而致慢性癫痫。减轻癫痫损伤的根本措施是抑制致痫区神经元的异常放电，控制癫痫的发作，但如何保护非致痫区的神经元，使之对癫痫放电的易感性降低，增加神经元对缺氧损伤的耐受性，从而减少痫性放电的传播和癫痫发作以及神经元的损伤，也是非常重要的。 近年来，继缺血缺氧耐受现象的发现，人们开始关注癫痫预处理在神经元保护中的作用，在动物实验中发现了癫痫耐受现象，即一次轻微、短暂的痫性发作，能减轻相隔一定时间后较长时间、严重的癫痫引起的神经元损伤。有研究表明癫痫预处理保护作用机制可能与缺血耐受产生机制相似，同样涉及神经介质、受体及基因的表达等一系列过程。但以往的研究大都应用海人酸(KA)致痫大鼠预处理模型，未见戊四氮(PTZ)致痫预处理模型的报道。戊四氮作为中枢神经系统兴奋剂，本身不具有神经毒性作用，如果致痫动物出现神经元损伤，可明确判断是癫痫发作本身所致，使得结果分析更直观、简单。以往的研究表明，星形胶质细胞GFAP 表达在脑缺血缺氧耐受诱导中上调，表明星形胶质细胞在脑缺血缺氧耐受诱导中起重要作用。星形胶质细胞在脑癫痫耐受诱导中的作用有待进一步阐明。在戊四氮致大鼠癫痫持续状态模型基础上，经癫痫预处理，制作大鼠癫痫耐受模型；观察癫痫预处理对大鼠行为学、海马组织形态学及星形胶质细胞 GFAP 表达的影响，初步探讨癫痫耐受诱导的机制。 第一部分癫痫预处理对戊四氮致痫大鼠海马神经元的保护作用方法 1.动物模型 成年雄性 Sprague-Dawley(SD)大鼠51只，体重180～220g，实验动物随机分4组： ①对照组(n=6)：腹腔注射1.5ml生理盐水；②癫痫预处理组(n=15)：首先按60mg/kg腹腔注射PTZ溶液，以后每10分钟注射5mg/kg，至给药总量为80mg/kg，诱发大鼠短暂癫痫发作；③癫痫损伤组(n=15)：首先按65mg/kg腹腔注射PTZ溶液，10分钟后注射10mg/kg，然后每10分钟注射5mg/kg，直至给药总量为110mg/kg，诱发大鼠出现癫痫持续状态；④癫痫预处理+癫痫损伤组(n=15)：首先按癫痫预处理组给药方式腹腔注射PTZ溶液；3天后按癫痫损伤组方式腹腔注射PTZ溶液。模型制作过程中大鼠出现死亡或不符合模型要求者予以剔除并补充，以保证每组动物15只。 2.脑电图正常大鼠麻醉后固定于脑立体定位仪上，放置皮质电极，待大鼠清醒后，按上述分组制作模型，描记脑电图。 3.大鼠行为学观察PTZ腹腔注射后观察大鼠行为学变化，记录首次RacineⅣ～Ⅴ级发作的潜伏期及Ⅳ～Ⅴ级发作持续时间。 4.大鼠海马CAl、CA3区组织形态观察大鼠末次给药后7天断头取脑，石蜡切片进行硫堇染色，于光学显微镜下观察海马CA1、CA3区组织形态并对其组织学改变进行分级(0级：无神经元死亡；1级：散在神经元死亡；2级：成片的神经元死亡；3级：几乎全部的神经元死亡)，取双侧平均等级作为统计值。高倍镜下计数海马CA1、CA3区每1mm区段内细胞膜完整、胞核饱满、核仁清晰的锥体细胞数目，每张切片双侧海马各计数7个区段取平均数为神经元密度(ND)。 第二部分癫痫预处理对大鼠海马星形胶质细胞GFAP表达的影响方法 1.动物模型 成年雄性SD大鼠24只，体重180～220g，随机分为4组：①对照组(n=6)：腹腔注射1.5ml生理盐水；②癫痫预处理组(n=18)：首先按60mg/kg腹腔注射PTZ溶液，以后每10分钟注射5mg/kg，至给药总量为80mg/kg，诱发大鼠短暂癫痫发作。根据癫痫预处理后取材时间点的不同进一步分为1d、3d、5d组(每组n=6)，分别于癫痫预处理后1d、3d、5d取材。 2.大鼠海马GFAP免疫组织化学染色 应用免疫组化SP法观察大鼠海马GFAP的表达。癫痫预处理后，于相应时间点麻醉大鼠取脑，切片经抗原修复、羊血清封闭后，加GFAP抗体，再经二抗、三抗孵育，DAB显色后置显微镜下观察记录。 结论： 1.戊四氮对大鼠的致痫程度与戊四氮剂量有关。 2.癫痫预处理可以使戊四氮损伤大鼠致痫程度降低，海马神经元损伤明显减轻，即癫痫预处理能够诱导癫痫耐受。 3.癫痫预处理后大鼠海马星形胶质细胞GFAP表达上调，提示星形胶质细胞在癫痫耐受诱导中有重要作用。