鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物高水平耐药机制研究

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目的:了解本地区鲍曼不动杆菌临床分离株对21种常用抗菌药物的耐药情况;检测7种16S rRNA甲基化酶、3种氨基糖苷修饰酶以及1种外排泵基因在鲍曼不动杆菌的分布;探讨其在介导氨基糖苷类抗菌药物高水平耐药及多重耐药中的作用,为鲍曼不动杆菌感染的治疗提供实验室依据。方法:琼脂对倍稀释法测定临床分离的110株非重复鲍曼不动杆菌菌株对21种临床常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),以阿米卡星MIC≥256μg∕ml为界点,将鲍曼不动杆菌分为对氨基糖苷类高水平耐药组(60株)和低水平耐药组(50株);PCR法检测7种甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE、npmA)和3种氨基糖苷修饰酶基因(aac(6’)-Ib、ant(3’’)-Ia、aph(3′)-I),并分析两组间阳性基因检出率的差异性,RT-PCR初步分析两组中4种阳性基因armA、aac (6’)-Ib、ant(3’’)-Ia、aph(3′)-I mRNA水平的表达情况;PCR扩增外排泵基因(adeB),将外排泵adeB基因阳性菌株分为多重耐药组和相对敏感组,对两组菌株分别进行RT-PCR,并分析在mRNA水平表达量的差异性。结果:110株鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类的耐药率在50.1%-83.8%之间,且对该类抗生素呈现较高水平的耐药性,其MIC≥256μg∕ml的比例在46.4%-65.4%之间,对多粘菌素B最敏感,敏感率为100%,其次为亚胺培南和美罗培南,耐药率分别为8.2%和9.1%,其余药物耐药率在43.6%-93.6%之间。在对氨基糖苷类高水平耐药组中,66.7%的菌株(40/60)检测到armA,其余6种甲基化酶基因未检出。51.7%(31/60)检测到aac(6’)-Ib,81.7%(49/60)检测到ant(3’’)-Ia,58.3%(35/60)检测到aph(3′)-I,而在低水平耐药组中7种甲基化酶基因均未检出,4%(2/50)检测到aac (6’)-Ib,6%(3/50)检测到ant(3’’)-Ia,4%(2/50)检测到aph(3′)–I,两组间每种基因检出率的差异具有统计学意义(p<0.05)。RT-PCR结果显示高水平耐药组菌株均扩增出与目的基因片段大小相近的片段。而在低水平耐药组中目的基因仅有部分扩增为阳性结果。有66株细菌检测到外排泵adeB基因,检出阳性率为60%;在adeB基因阳性菌株中多重耐药菌株61株,比例高达92.4%,相对敏感菌株仅为5株。RT-PCR初步分析adeB基因在两组间mRNA表达量的差异性具有统计学意义(p<0.05)。结论:1.本地区鲍曼不动杆菌临床分离株对常用抗菌药物的耐药性广泛,对氨基糖苷类抗生素存在高水平耐药。2.碳青霉烯类、多粘菌素B以及米诺环素对鲍曼不动杆菌感染的治疗效果较好。3. 16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷修饰酶在鲍曼不动杆菌中检出率较高,与氨基糖苷类抗生素高水平耐药关系密切。4. adeB基因高表达在对氨基糖苷类抗生素耐药性及多重耐药性方面发挥重要作用。
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