猪源肠道与呼吸道细菌的分离鉴定

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猪肠道与呼吸道微生物菌群不仅对宿主的生理、健康有着重要作用,同时也是重要微生物资源的来源,因此对猪肠道与呼吸道细菌的分离鉴定就显得尤为重要,本研究利用16S rRNA序列分析方法对猪源肠道与呼吸道细菌进行了鉴定。根据细菌的生长特性和形态学观察,从猪肠道粪便样品中共分离到126株细菌。设计细菌16S rRNA基因通用引物对其中的11株细菌进行了PCR和16S rRNA序测定,并对测序结果进行BLAST比对分析。结果表明:11株细菌包括2株柠檬明串珠菌、1株鼠乳杆菌、1株唾液乳酸杆菌、1株类肠膜魏斯氏菌、2株融合魏斯氏菌、2株洛菲氏不动杆菌和2株粪肠球菌。对这些细菌的生长特征和菌体特征进行系统的鉴定和分析。11株细菌中,柠檬明串珠菌、鼠乳杆菌和唾液乳酸杆菌是肠道益生菌,粪肠球菌和洛菲氏不动杆菌是条件致病菌,类肠膜魏斯氏菌和融合魏斯氏菌是在猪体发现的新型细菌。药敏试验结果显示,洛菲氏不动杆菌M8对阿莫西林、磺胺嘧啶、头孢类等多种抗生素敏感,但对环丙沙星耐药;而粪肠球菌M11对利福平、利奈唑胺、万古霉素敏感,对阿莫西林、红霉素、环丙沙星等其他多种抗生素耐药。通过细菌的生长特性和形态学观察,从176份有肺炎症状猪的肺脏病料组织中分离出82株细菌。设计细菌16S rRNA基因通用引物对其中25株细菌进行了PCR和序列测定,并对测定序列进行了BLAST比对分析。结果表明:25株细菌中包括1株粪肠球菌;2株卡他莫拉氏菌;3株猪链球菌;2株短杆菌;6株动性杆菌;1株嗜冷杆菌;1株绿色气球菌;1株产低温脂肪酶菌;3株芽孢杆菌和5株红斑丹毒丝菌。对这些细菌的菌落生长特征和菌体特征进行了系统鉴定和分析。25株细菌中,芽孢杆菌是益生菌,粪肠球菌、卡他莫拉氏菌和绿色气球菌是条件性致病菌,猪链球菌和红斑丹毒丝菌是致病菌,而短杆菌、动性杆菌、嗜冷杆菌和产低温脂肪酶菌都是在猪体发现的新型细菌。红斑丹毒丝菌ER4和卡他莫拉氏菌S7的生长曲线结果符合细菌生长规律,红斑丹毒丝菌ER4在菌液浓度为1.89×109时生长速度达到最大,而卡他莫拉是菌S7在菌液浓度为2.329×1010时生长速度达到最大。小鼠致病性试验结果表明,红斑丹毒丝菌具有较强的毒力。本研究经16SrRNA基因序列分析方法鉴定的36株细菌,其中,柠檬明串珠菌、鼠乳杆菌、唾液乳酸杆菌和芽孢杆菌是肠道益生菌,粪肠球菌、洛菲氏不动杆菌、卡他莫拉氏菌、绿色气球菌是条件致病菌,猪链球菌和红斑丹毒丝菌是致病菌,类肠膜魏斯氏菌、融合魏斯氏菌、短杆菌、动性杆菌、嗜冷杆菌和产低温脂肪酶菌都是在猪体发现的新型细菌。本研究验证了基于16S rRNA基因的PCR扩增和测序技术在鉴定猪源肠道与呼吸道细菌的可行性,同时获得了多株致病菌、条件性致病菌以及多株新型细菌,为进一步研究该类细菌的生物学特性等奠定了基础。
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