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目的四环素类抗生素为广谱抗生素,包括四环素、土霉素、金霉素、强力霉素等,广泛应用于各类感染性疾病的治疗。但由于不规范用药,在动物组织、牛奶、蜂产品中超标残留,对人类的健康存在潜在危险,引起了人们的极大关注,其检测方法也在不断的发展。本研究采用单克隆抗体技术和胶体金免疫层析技术,制备了四环素免疫金快速检测试纸条,目的是用于食品中四环素残留的快速检测。方法本研究采用Mannich法合成了人工抗原TC-BSA、TC-OVA,通过紫外扫描确认半抗原TC已和载体BSA和OVA交联。将抗四环素单克隆杂交瘤细胞株,接种到小鼠腹腔诱生腹水。腹水经硫酸铵盐析法纯化,单抗蛋白质浓度为4.2mg/mL,IC50为1.9ng/mL,单抗对四环素类抗生素特异性好。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,成功标记单抗后吸附在胶体金结合垫上,将TC-OVA(检测线)和羊抗鼠IgG(质控线)分别包被在硝酸纤维素膜上,与样品垫、吸水垫组装成试纸条,试纸条通过检测线和对照线颜色深浅对比判断结果。本实验稳定胶体金最适抗体蛋白用量为7.5μg/mL,选择Ahlstorm8964玻璃纤维膜为胶体金结合垫,MILLIPORE135s硝酸纤维素膜为层析材料,SB06为样品垫材料,CH37M为吸收垫。结果本试纸条对四环素方法检测线为10ng/ml,在土霉素浓度大于15ng/ml、强力霉素大于10ng/ml,金霉素大于20ng/ml时,和四环素有交叉反应。和青霉素、链霉素、庆大霉素、氯霉素、红霉素、磺胺类无交叉反应。四环素在猪肉样品中的检测线为10ng/ml,牛奶和蜂蜜中检测线为50ng/ml,能够满足国家标准的检测要求。结论本研究制备的四环素胶体金快速检测试纸条检测快速、简便,灵敏度、特异性、稳定性均达到检测要求。