【摘 要】
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线粒体中的丝氨酸蛋白酶LON/PIM1执行管家功能和调节功能;在高温、缺氧、损伤等应激情况下,LON蛋白酶对细胞的凋亡调控起着重要的作用。 本研究尝试使用RNAi的方法来减少
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线粒体中的丝氨酸蛋白酶LON/PIM1执行管家功能和调节功能;在高温、缺氧、损伤等应激情况下,LON蛋白酶对细胞的凋亡调控起着重要的作用。 本研究尝试使用RNAi的方法来减少肿瘤细胞线粒体中丝氨酸蛋白酶LON的表达。应用RT-PCR方法筛选了乳腺癌MCF-7细胞等8种具有代表性的肿瘤细胞系,结果显示乳腺癌MCF-7细胞中LON基因的表达量较高,因此被选为研究LON基因RNA干涉的靶细胞。设计针对LON基因的siRNA并连入pSilencer2.1载体构建重组表达质粒pSilencer-LON,经瞬时与稳定两种转染方式转染MCF-7细胞。阳性克隆经RT-PCR法评估LON基因表达量,同时设管家基因β-actin作为标准对照。 结果显示LON基因的表达量在未转染的细胞和转染对照质粒的细胞之间无明显差别,但在转染质粒pSilencer-LON的细胞中明显降低。用MTT法检测转染细胞的生长活性,显示转染对照质粒对细胞的生长活性无明显影响(P>0.05),而转染干涉质粒却能抑制细胞的生长活性(P<0.05)。测绘MCF-7细胞的生长曲线并用流式细胞仪检测细胞的生长周期,结果显示未转染和已转染的各组间的差异无明显统计学意义。 研究结果提示尽管LON基因下调没有明显的影响细胞的周期,但从MTT检测结果分析该基因的下调可能影响细胞的代谢能力,进一步的探索有助于对其调控机理的诠释。
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