厚朴挥发性成分的HS-SPME-GC指纹图谱建立

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厚朴(Magnoliae officinalis Cortex)为木兰科植物厚朴(Magnolia officinalis Rehd.et Wils.)及凹叶厚朴(Magnolia officinalis Rehd. et Wils.var. biloba Rehd. et Wils.)的干燥干皮、枝皮和根皮。本课题以厚朴为研究对象,采集和购买了多批不同产地或部位的厚朴药材共15批,采用顶空-固相微萃取-气相色谱法(HS-SPME-GC)对其成分进行分析,并结合顶空-固相微萃取-气相色谱-质谱(HS-SPME-GC-MS)的鉴定结果,建立其中药色谱指纹图谱。通过聚类分析、相似度分析的结果对其品质进行评价。同时为了比较不同方法及不同化学模式之间的异同,采用高效液相色谱法(HPLC)获取反映不同批次厚朴化学本质差异的数量化特征,为厚朴的质量控制提供科学的、系统的评价依据。1.对HS-SPME-GC法分析厚朴挥发性成分的萃取条件和色谱条件进行优化。通过考察不同条件下出峰个数和总峰面积的变化差异,对不同涂层的SPME商用萃取头、萃取温度、萃取时间和样品用量等影响因素进行优化,结果表明:采用PDMS/DVB萃取头,取厚朴粉末0.2g在70℃恒温条件下萃取60min,可达到较好的萃取效率;同时也对色谱柱、升温程序、流速、分流比等分离因素进行了条件优化,筛选出HP-50毛细管柱(30 m×0.32mm×0.25μm),程序升温:50℃(1min),以4℃/min上升到140℃(2min),以2℃/min上升到180℃,以12℃/min上升到280℃(5 min),流速1.3 ml/min,分流比为15:1的色谱条件较适合建立厚朴药材的中药色谱指纹图谱。2.按上述优化条件对不同产地或不同部位的15批厚朴药材进行批量分析,共获得42个共有色谱峰,并经HS-SPME-GC-MS鉴定确认了15个组分。以喇叭茶醇为内参照峰,建立指纹图谱。通过聚类分析,15批次药材被分成4类。其中1、2类为推荐品,选取其中10个批次建立共有模式,并计算生成的对照图谱与15个批次之间的相似度,结果表明各批次的相似度均在0.9以上,未发现离群样品,而其中11号批次因保存不当导致挥发性成分流失,其聚类结果在第四类、相似度在15个批次中最低,与实际情况相符,所以本研究所采用的HS-SPME方法适合于中药材GC指纹图谱的建立。3.对21个批次厚朴的主要药效成分厚朴酚和和厚朴酚进行比较分析,建立其共有模式,以厚朴酚、和厚朴酚为考察指标,用系统聚类分析对其进行化学模式识别研究。21批药材被分为4类,其中1类为推荐品,较好的反映了不同产地的厚朴酚性成分的差异。与厚朴药材GC指纹图谱进行比较,未发现厚朴药材GC指纹图谱的分析结果与其主要药效成分含量的差异性之间的关联。
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