胡桃醌对人结肠癌HCT-8细胞黏附及基质金属蛋白酶活性的影响

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在我国结直肠癌(colorectal cancer)是常见和多发肿瘤,发病率位于恶性肿瘤发病率的第三位,且发病率呈上升趋势。结直肠癌术后肿瘤侵袭及转移比较多见,严重影响患者预后。大约20%结直肠癌患者会发展为转移性结直肠癌,这部分患者5年生存率尚不到10%。细胞黏附能力改变是肿瘤细胞发生侵袭、转移的始动步骤。基质金属蛋白酶(MMPs)能降解细胞外基质的多种成分,能破坏限制肿瘤细胞侵袭的组织学屏障。明胶酶(MMP-2、MMP-9)是降解Ⅳ型胶原的主要蛋白水解酶,在多种恶性肿瘤组织中表达升高,在肿瘤侵袭、转移起重要作用。胡桃醌(juglone)是从天然胡桃属植物中分离提取的重要物质,其对血液系统及实体肿瘤细胞的增殖具有抑制作用,并能诱导某些肿瘤细胞凋亡,但有关胡桃醌对肿瘤侵袭、转移影响的研究很少。本实验应用MTT法筛选出观察细胞黏附能力适宜的胡桃醌浓度;观察胡桃醌处理的HCT-8细胞黏附能力的变化;明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9活性;Western blot技术检测细胞MMP-2和MMP-9蛋白表达水平。本研究的主要研究结果是:(1)一定浓度的胡桃醌能抑制人结肠癌HCT-8细胞生长,且呈时间和浓度依赖性。(2)与空白对照组比较,1.25、2.5、5、10和20μg/ml胡桃醌处理可使HCT-8细胞黏附率降低,并呈浓度依赖性;(3)2.5、5、10和20μg/ml胡桃醌处理HCT-8细胞可使MMP-2活性降低,各浓度胡桃醌处理组MMP-9活性均降低;(4)各浓度胡桃醌处理组MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均降低。本研究的主要结论是:(1)胡桃醌明显抑制人结肠癌HCT-8细胞黏附,且呈浓度依赖性;(2)胡桃醌能降低人结肠癌HCT-8细胞MMP-2、MMP-9活性,下调其蛋白表达水平。这些结果提示,胡桃醌能降低HCT-8细胞降解细胞外基质的能力,可能抑制结直肠癌细胞的侵袭及转移。降低MMP-2和MMP-9活性、抑制其蛋白表达可能是胡桃醌抑制HCT-8细胞黏附的机制。
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