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鸡球虫病是严重危害全世界养禽业的一类寄生虫病。目前该病的防治主要依靠化学药物，少量依靠疫苗。但化药治疗由于存在耐药性、药物残才留等不利影响，因此用疫苗免疫代表了未来鸡球虫病防治的发展方向。卡介苗具有良好的安全性和内在佐剂特性，可以诱导坚强持久的细胞免疫，是表达重组外源基因的理想活菌疫苗载体。本实验室前期研究表明表达E. tenella rhomboid与ADF基因的球虫重组卡介苗疫苗具有较好的免疫保护效果，尤其是表达rhomboid基因的重组卡介苗的ACI值达到了180以上，显示用卡介苗来构建鸡球虫疫苗具有较好的前景。巨型艾美耳球虫是集约化鸡场最常见的3种球虫之一，常引起亚临床球虫病，使鸡的饲料转化率、增重和产蛋量受到影响。本研究在克隆巨型艾美耳球虫入侵相关基因AMA1的基础上，对该基因及编码蛋白进行了详细的生物信息学分析，然后构建AMA1基因的大肠杆菌-分枝杆菌穿梭载体和整合载体，SDS-PAGE与Western blotting结果显示成功表达了AMA1基因。用构建的表达AMA1抗原的重组BCG/pMV261-AMA1和BCG/pMV361-AMA1经三种不同免疫途径接种雏鸡，同源株攻虫后显示重组BCG疫苗皮下和滴鼻途径免疫优于口服途径，而且重组卡介苗滴鼻免疫能诱导较强的细胞和体液免疫反应。安全是疫苗应具备的基本条件。鉴于目前尚无卡介苗对鸡是否安全的相关报道，本试验中，将rBCG/pMV361-AMA1以不同剂量皮下注射免疫7日龄雏鸡，通过增重、脏器系数、血液生化以及器官组织学变化等指标来评价重组卡介苗对鸡的安全性。结果显示重组卡介苗正常剂量免疫对鸡增重、脏器系数、生化指标及器官组织结构等均无显著影响（p>0.05），重组卡介苗对鸡总体上是安全的。为进一步增强重组卡介苗的免疫保护效力，本研究利用SOE-PCR将鸡IFN-γ与巨型艾美耳球虫AMA1基因通过一柔性linker串联，构建重组表达载体pMV261-IFN-γ-Linker-AMA1，电穿孔转入卡介苗中，经热诱导后，SDS-PAGE及Western blotting鉴定发现重组卡介苗在约65kDa处有一明显的特异条带，显示融合蛋白成功在卡介苗中表达。将构建的rBCG/pMV261-IFN-γ-Linker-AMA1，rBCG/pMV261-AMA1以及BCG通过滴鼻途径接种雏鸡，经同源株攻虫研究其免疫保护效力。结果显示重组卡介苗免疫对同源株攻虫具有一定的免疫保护效力，其中rBCG/pMV261-IFN-γ-AMA1免疫两次的保护力要高于rBCG/pMV261-AMA1免疫两次，表明IFN-γ具有增强AMA1免疫效果的作用。综上，本研究构建了三种重组卡介苗，免疫试验显示均对同源株攻虫有一定的保护效力，同时评价了重组卡介苗对鸡体的安全性，为重组卡介苗疫苗在鸡球虫病乃至鸡其它传染性疾病中的应用奠定了基础。