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禽大肠杆菌病(E.coli)是由禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli, APEC)引起的局部或全身性感染的疾病。该病为临床常见疾病,对家禽养殖业有较大的危害。目前,临床上对大肠杆菌病主要应用喹诺酮类、氨基糖苷类、β-内酰胺类等3类药物进行防治。由于抗生素的滥用,该菌在药物的压力下,耐药性增强,甚至有超级细菌出现,已成为严重危害人类健康的公共卫生问题。本论文旨在收集辽宁省盘锦市地区规模化养殖场送检的疑似大肠杆菌病病死禽及死猪,分离病原菌,分析不同动物源大肠杆菌对临床常用的19种抗生素耐药情况,并探讨了大肠杆菌耐药机制,为大肠杆菌病的防治及新抗生素的开发提供参考。1、致病性大肠杆菌的分离鉴定从盘锦市部分县区规模化养殖场送检死禽及死猪中分离到39株细菌,通过肠杆菌科细菌生化试剂盒及吲哚实验、V-P实验、枸橼酸盐利用实验、七叶苷水解实验,鉴定出27株大肠杆菌。其中,鸡源18株、鸭源5株、鹅源2株、猪源2株。致病性实验结果显示,实验鼠死亡率达86.67%。由此说明,该27株大肠杆菌均为致病性大肠杆菌。2、27株致病性大肠杆菌对19种抗生素的耐药性分析按CLSI推荐的Kirby-Bauer法,采用19种抗生素对27株大肠杆菌进行药物敏感性试验。结果表明,在4种p-内酰胺类药物中,分离大肠杆菌菌株对第四代头孢类药物头孢吡肟的耐药率最低,为36%；对第三代头孢类药物头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松的耐药率均为52%。在4种喹诺酮类药物中,其对氧氟沙星耐药率最低,为32%；对环丙沙星耐药率最高,为88%；对左氧氟沙星和诺氟沙星的耐药率均为68%。在7种氨基糖苷类药物中,其对链霉素耐药率最低,为48%；对大观霉素耐药率最高,为88%；其中,对庆大霉素和阿莫西林的耐药率也较高,分别为84%和72%；对卡那霉素、阿米卡星、妥布霉素的耐药率分别为52%、56%、68%。在4种其他类药物中,大肠杆菌对利福平耐药率最高,为96%；对呋喃唑酮耐药率最低,为28%；对四环素耐药率为92%,对氯霉素耐药率为72%。其中,鸡源的2株致病性大肠杆菌对19种抗生素均耐药。本研究药物敏感性试验为盘锦地区科学用药提供了依据。3、2株对19种抗生素耐药的鸡源大肠杆菌超级耐药基因(NDM-1)及质粒介导耐药基因的检测与分析根据文献和GenBank上发表的基因序列,设计合成了4对引物,分别扩增NDM-1耐药基因、质粒中介导喹诺酮耐药基因qnrA、质粒中介导β-内酰胺酶(头孢类)耐药基因SHV-1和质粒中介导氨基糖苷类及喹诺酮类耐药基因aac(6’)-ib-cr。应用PCR方法对该2株鸡源大肠杆菌进行基因扩增。PCR检测结果显示,检测到aac(6’)-ib-cr阳性菌1株,其余检测结果均为阴性。将含有耐药基因aac(6’)-ib-cr质粒转入到大肠杆菌国际标准株ATCC25922后,与原受体菌相比,转化细菌对19种抗生素耐药性明显提高。由此说明,含有aac(6’)-ib-cr耐药基因质粒对细菌耐药性的形成可能有密切关系。