基于TLR4/NF-κB信号通路探讨紫正地黄汤治疗急性咽炎的机制研究

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目的:1.通过对急性咽炎的临床研究,明确郑氏喉科紫正地黄汤对肺胃热盛型急性咽炎的疗效;初步探讨紫正地黄汤治疗肺胃热盛型急性咽炎的机制。2.通过急性咽炎动物模型实验研究,基于TLR4/NF-κB信号通路,探索紫正地黄汤治疗急性咽炎的可能机制。方法:1.临床实验:收集安徽省中医药大学第一附属医院2017.10-2020.01耳鼻喉科门诊中符合肺胃热盛型急性咽炎病例共104例。根据患者就诊顺序编号,按随机数据表法将104例患者等分为中药组(紫正地黄汤)、西药组(阿莫西林),分别给予相应药物治疗5天。研究人员记录患者的性别、年龄、身高、体重、不良嗜好(吸烟、饮酒)及病程等相关资料。临床医师则对前来就诊患者治疗前后的症状、体征进行记录评分。收集治疗前及治疗5天后患者的血液,检测血液中炎性细胞水平,用ELISA法测定急性咽炎患者血清中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α各种炎症相关因子水平。整个治疗结束后询问患者并记录药物治疗起效时间及其对本次治疗药物的满意度。2.动物实验:60只健康SD大鼠,随机分为空白组、模型组、对照组(阿莫西林)、实验组(紫正地黄汤)。除空白组外,其余各组造急性咽炎模型,观察给药前后急性咽炎模型大鼠:口腔粘膜组织的颜色、光泽、充血、肿胀程度及大鼠活动度、皮毛、饮食等一般情况。治疗结束后取大鼠口腔粘膜,HE染色,对大鼠口腔粘膜病理改变进行评价。取大鼠腹主动脉血,使用ELISA试剂盒检测血清中TNF-α、IL-Iβ、IL-6、IL-10水平;取大鼠口腔粘膜蛋白印迹法(Western Blot)测定大鼠口腔黏膜中TLR4、p-NF-κB-P65蛋白表达水平。3.采用SPSS20.0统计分析软件对临床实验数据及动物实验数据进行统计分析。结果:1.临床实验结果:对两组患者治疗前后症状、体征积分进行统计分析,使用t检验,P<0.01,证明两种治疗均对急性咽炎有效;组间比较,中药组及西药组在总体疗效及主要症状体征上无明显差异(P>0.05),但中药组对次要症状体征改善较西药组明显(P<0.01),且平均起效时间较西药组短(P<0.01),患者对中药治疗的满意度较西药高(P<0.01)。血常规检查,中药组与西药组治疗前后血液中炎症细胞,使用t检验,P<0.01,差异有统计学意义,说明两种药物均可减轻患者炎症反应;组间比较,两组治疗后血液中炎症细胞,使用t检验,P>0.05,差异无统计学意义,说明两种药物对炎症反应有相同的疗效。用ELISA检测两组患者治疗前后血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10,使用t检验,P<0.01,差异有统计学意义;组间比较,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10,使用t检验,P>0.05,无统计学意义。研究证实两种治疗方法均显著降低患者血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平,升高IL-10水平。2.动物实验结果:与空白组比较,模型组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6显著性升高,IL-10水平显著降低,使用t检验,P<0.01,差异有统计学意义。给予紫正地黄汤或阿莫西林治疗后,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子较模型组显著降低,IL-10水平显著升高,使用t检验,P<0.01。与空白组相比,模型组大鼠口腔黏膜溃烂,黏膜血管充血、红肿,病理可见大量炎性细胞浸润。给予紫正地黄汤或阿莫西林治疗后,较之模型组,口腔粘膜充血肿胀溃烂程度也有所减轻,病理可见少量炎症细胞浸润。与空白组比较,模型组大鼠口腔黏膜内TLR4、p-NF-κB-P65蛋白表达水平显著升高,使用t检验,P<0.01。与模型组比较,给予紫正地黄汤或阿莫西林治疗后急性咽炎大鼠口腔黏膜内TLR4、p-NF-κB-P65蛋白表达水平显著降低,使用t检验,P<0.01,紫正地黄汤和阿莫西林均能显著降低口腔黏TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平。结论:1.紫正地黄汤对肺胃热盛型急性咽炎有良好的治疗作用。治疗5天后,中药组急性咽炎患者主要症状(咽喉痛),次要症状(咳嗽、咽干、口渴、大便)、体征均有改善。紫正地黄汤改善急性咽炎患者次要症状方面较阿莫西林更为有效。2.紫正地黄汤对急性咽炎大鼠模型有良好的治疗作用。紫正地黄汤明显改善急性咽炎大鼠的全身症状,减轻了急性咽炎大鼠的口腔黏膜红肿溃烂,病理显示口腔黏膜固有膜和腺体之间炎症细胞明显减少。3.紫正地黄汤治疗急性咽炎的作用机制可能是通过调控TLR4/NF-κB信号通路实现的。紫正地黄汤能有效改善肺胃热盛型急性咽炎患者外周血中炎症细胞的水平,并能显著下调血清中的TNF-α、IL-1β、IL-6相关炎症相关因子的表达水平,上调IL-10表达水平,差异有统计学意义(P<0.01)。动物实验也得到类似的结果,实验组较模型组大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6表达以及黏膜组织中TLR4、p-NF-κB-P65蛋白表达水平下调,IL-10水平升高,差异有统计学意义(P<0.01),而与对照组比较无明显差异(P>0.05)。
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