背景:骨折相关感染（fracture-related infection,FRI）是创伤外科术后常见的严重并发症,也是骨折手术后最难治疗的挑战之一。组织培养法是临床上识别病原体最常见的检测方法,但因其培养时间长、结果易受影响等缺点,制约手术后快速精准用药。因此,我们旨在利用FRI中的常见致病菌,建立一种简便、快速的实用性的多重PCR检测方法,用于临床FRI检测。目的:利用FRI中的常见致病菌,建立一种更为简便、快速的临床实用性的Taqman多重荧光定量（TaqMan multiplex fluorescent quantitative PCR,MqPCR）检测方法。方法:（1）通过文献调研与回顾性分析近两年青海省人民医院的FRI确诊结果,确定FRI常见的致病菌。（2）参考国内外相关文献,确定5种常见致病菌的特异基因。根据这些基因的特异序列设计引物与探针,构建标准质粒,建立检测5种常见病原菌的MqPCR方法。优化实验条件,验证该方法的特异性、灵敏性、重复性等方面。（3）利用组织培养法和MqPCR方法检测66例FRI临床样本和24例对照组样本的感染状况。分别计算两种检测方法的敏感性、特异性、阳性预测值（positive predictive value,PPV）、阴性预测值（negative predictive value,NPV）、Youden指数和ROC曲线下面积（area under the ROC curve,AUC）,比较两种检测方法的检测效能。结果:（1）通过文献调研与回顾性分析近两年青海省人民医院260多例FRI确诊结果,发现金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）、表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis,SE）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）、大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）和阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae,EC）是FRI的常见致病菌。（2）依据国内外相关文献,5种常见致病菌的特异基因依次为金黄色葡萄球菌的nuc基因、表皮葡萄球菌的16S基因、铜绿假单胞菌的外毒素A基因、大肠杆菌的ECs1048基因和阴沟杆菌的Omp X基因。MqPCR法检测SA、SE、PA、E.coli和EC这5种质粒DNA时,发现扩增曲线只出现在各自的模板下,不同的病原菌之间没有出现交叉反应。同时,该方法的组内与组间变异系数（coefficient of variation,CV）均小于0.5%,有较好的重复性与稳定性。表明成功构建了5种常见病原菌的MqPCR方法。（3）在66例FRI病例中,组织培养法检测出63例（95.5%）阳性结果,MqPCR法检测出56例（84.8%）。24例对照组样本中,组织培养法检测出3例（12.5%）阳性结果,MqPCR法检测出4例（16.7%）。MqPCR法的敏感性为93.3%、特异性为66.7%,而组织培养法的敏感性和特异性分别为95.4%和87.5%。若只考虑感染了5种常见致病菌的病例,MqPCR法的特异性从66.7%变为90.9%,要高于组织培养法（87.5%）。结论:总而言之,基于TaqMan探针的MqPCR检测法具有定量准确、快速（＜5小时）、自动化、简单和重现性好等优点。不仅如此,其检测性能可与组织培养法相媲美,有望在初步检测病原菌方面得到广泛的应用。