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第一部分TREM-2在脓毒症小鼠中的表达及其与脓毒症发生发展的关系研究目的：TREM-2是一类主要表达于活化的巨噬细胞、属于免疫球蛋白超家族的细胞表面受体。Ⅱ型细胞因子(如IL-4等)能诱导巨噬细胞TREM-2的表达。TREM-2是包括G+菌、G-菌和酵母菌等在内的病原微生物的吞噬受体,TREM-2及其介导的信号通路能明显减弱巨噬细胞产生与释放促炎介质的能力。因而推测TREM-2可能在脓毒症的感染和免疫炎症调控过程中发挥重要作用。因此,本部分研究通过检测脓毒症小鼠重要脏器／组织巨噬细胞TREM-2的表达水平,分析细胞TREM-2的表达水平和脓毒症发生发展之间的相关性。研究方法：采用CLP诱导小鼠脓毒症模型,以假手术小鼠作为对照组,于术后Oh、6h、12h、24h、72h、120h、168h取小鼠肝脏、肺脏、脾脏和腹腔灌洗液、外周血等。采用免疫组化法检测肝脏、肺脏和脾脏组织中TREM-2的表达水平,并采用双重免疫荧光标记法对TREM-2的表达进行细胞定位。采用流式细胞术检测腹腔巨噬细胞中TREM-2的表达水平,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测外周血IL-4、IL-13和IL-10浓度,采用琼脂平板培养法检测腹腔细菌感染程度。结果：脓毒症小鼠和对照小鼠术后0h各脏器组织均不表达TREM-2。在肝脏、肺脏和脾脏,脓毒症小鼠CLP术后6h TREM-2表达水平开始增强,并于术后72h到达峰值,之后又呈逐渐下降,而对照组小鼠在各时间点均未检测到TREM-2表达。双重免疫荧光标记法证实TREM-2表达于组织巨噬细胞。在腹腔巨噬细胞中,脓毒症小鼠TREM-2的表达变化与其他脏器一致,而对照组小鼠在术后24h TREM-2表达水平稍有增加,两组小鼠TREM-2表达水平在术后72h时有显著性差异(P<0.05)。脓毒症小鼠血浆IL-4浓度在CLP术后24h达峰值,其动态变化趋势与TREM-2的表达变化相似,但要早于TREM-2。脓毒症小鼠腹腔细菌感染在CLP术后逐渐增加,于术后72h感染最严重,其动态变化与TREM-2的表达变化完全一致。但TREM-2的表达变化与血浆IL-13和IL-10的浓度变化无关。结论：在脓毒症小鼠中,TREM-2的表达水平呈先增强后减弱的变化特征,于脓毒症72h后达峰值。TREM-2的表达变化可能与IL-4的诱导性有关,而且可能在脓毒症感染的免疫防御中发挥重要作用。第二部分阻断TREM-2对脓毒症发病的影响研究目的：鉴于TREM-2在脓毒症发病过程中的表达变化特征,因此本部分研究主要探讨阻断内源性TREM-2的作用对脓毒症发病的影响及机制。研究方法：将CLP诱导的脓毒症小鼠,随机分为两组,在CLP18h后,通过尾静脉注射的方法分别给予20μg小鼠TREM-2/人IgG1重组蛋白(mTREM-2/IgG1组)和201μg人IgG1重组蛋白(IgG1组),观察其7天生存率。同时,分别于给予重组蛋白24h、72h和120h后,取腹腔灌洗液和外周血,采用琼脂平板培养法检测腹腔细菌感染程度,采用ELISA法检测腹腔灌洗液和外周血IL-10浓度。结果：与IgG1组相比,mTREM-2/IgG1组小鼠7天生存率显著降低(8.3%vs.50%；P<0.05)。给予重组蛋白24h后,两组小鼠腹腔细菌感染程度无显著性差异(P>0.05)；给予重组蛋白72h和120h后,mTREM-2/IgG1组小鼠腹腔细菌感染均较IgG1组小鼠明显加重(P<0.05)。两组小鼠腹腔灌洗液和外周血IL-10浓度无显著性差异。结论：阻断TREM-2的作用降低脓毒症小鼠的7天生存率,其原因可能与加重脓毒症小鼠的细菌感染有关。第三部分重组TREM-2对脓毒症的保护作用研究研究目的：鉴于TREM-2在脓毒症中呈诱导性表达,且其表达峰值较迟,而阻断TREM-2的作用则加重脓毒症的发病,因此本部分研究主要探讨在脓毒症发病早期重组TREM-2对脓毒症的保护作用及其机制。研究方法：构建表达TREM-2的重组腺病毒和对照腺病毒,分别感染BMMC,用Western-blot和流式细胞术分别检测TREM-2蛋白的表达水平。以高表达TREM-2的BMMC为研究对象,一方面采用激动性抗体激活TREM-2介导的信号通路,并用100ng/ml脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激,观察重组TREM-2对炎症反应的影响；另一方面观察高表达TREM-2的BMMC对荧光颗粒和细菌的吞噬功能。将高表达TREM-2的BMMC于脓毒症模型诱导后不同时间点(2h、4h、6h)回输至小鼠体内,观察重组TREM-2对脓毒症小鼠7天生存率的影响。在脓毒症后2h细胞回输组,于细胞回输后24h和48h分别取小鼠外周血、腹腔灌洗液、肝脏、肺脏和脾脏等。采用琼脂平板培养法检测全身和局部细菌感染程度,采用ELISA法检测炎症因子IL-10浓度,采用组织化学法等观察脏器形态功能。结果：重组腺病毒能在BMMC中高表达TREM-2。激活BMMC中的TREM-2分子,能活化其下游的Akt信号分子,经LPS刺激后,显著增强IL-10mRNA水平。高表达TREM-2的BMMC对荧光颗粒和细菌均有显著增强的吞噬作用。脓毒症模型诱导后2h和4h回输高表达TREM-2的BMMC能明天改善小鼠的7天生存率。在脓毒症后2h细胞回输组,细胞回输24h和48h后小鼠全身和局部细菌负荷量明显下降,肝脏和肺脏损伤明显减轻,脾脏细胞凋亡减少,但外周血和腹腔灌洗液中IL-10水平无显著变化。结论：脓毒症发病早期增强TREM-2的表达对脓毒症有保护作用,可有效改善脓毒症的预后；作用机制与其吞噬清除细菌的功能密切相关。