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目的:本实验选用三种人工合成抗菌肽,研究其对种植体周围炎主要致病菌具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌及血链球菌实验菌株生长的影响,探寻其对这三种细菌的生长抑制作用。同时测试不同浓度的抗菌肽对人成骨细胞系MG63细胞增殖的影响,评价其细胞毒性,进而筛选出一种抗菌肽,研究该抗菌肽对种植体周围炎优势致病菌牙龈卟啉单胞菌在光滑纯钛种植材料表面生物膜的影响效果。为完成抗菌肽在纯钛种植材料表面的协载和组装、构建具有抗菌活性的种植体表面改性材料提供细菌学实验依据。方法:一、抗菌肽Pac-525、KSL-W、KSL对种植体周围炎病原菌的影响依据Pac-525、KSL-W、KSL的氨基酸序列,人工合成这三种抗菌肽,高效液相色谱和质谱分析其纯度及准确性。实验采用标准肉汤稀释法研究Pac-525、KSL-W、KSL三种抗菌肽对血链球菌、具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC)。二、抗菌肽Pac-525、KSL-W、KSL的细胞毒性实验实验选用MTT法测定抗菌肽Pac-525、KSL-W、KSL对人成骨细胞系MG-63细胞的增殖影响,用酶标仪测定各孔在490nm波长处的吸光度值(D),并取其均数,计算细胞存活率,实验结果应用SPSS17.0统计软件处理,独立样本t检验,P<0.05为有统计学差异。三、抗菌肽Pac-525对纯钛表面牙龈卟啉单胞菌生物膜的影响1.钛片的制备:规格为直径10mm、厚度1mm,表面研磨、抛光至镜面,环氧乙烷消毒备用。2.非刺激性唾液的收集:唾液来源于口腔健康状况良好的志愿者。4℃下4500rpm离心30min,取上清液,滤器除菌,4℃保存备用。3.光滑纯钛片表面生物膜的建立:在37℃下唾液浸泡钛片24小时,待其表面形成获得性膜,转至24孔板,每孔加入菌液500μl,液体培养基1500μl,培养48小时,处理样品,扫描电镜下观察生物膜形成情况。4.抗菌肽Pac-525对光滑钛片表面牙龈卟啉单胞菌生物膜的作用:选取Pac-525大于其对牙龈卟啉单胞菌MIC的三个浓度并作用于生物膜24小时,口腔科常用氯己定漱口液为阳性对照组,通过激光共聚焦显微镜观察经特异荧光染料标记的生物膜,通过自带计算机软件计算生物膜厚度和活菌百分比,使用SPSS17.0统计软件进行统计学分析。结果:一、抗菌肽Pac-525、KSL-W、KSL对种植体周围炎致病菌的影响人工合成的三种抗菌肽Pac-525、KSL-W、KSL,经分析纯度均大于99%。药物敏感试验标准肉汤稀释法表明:Pac-525对血链球菌的MIC和MBC分别为0.125mg/ml及0.500mg/ml;对具核梭杆菌的MIC和MBC分别为0.0078mg/ml及0.0156mg/ml;对牙龈卟啉单胞菌的MIC和MBC分别为0.0625mg/ml及0.125mg/ml。KSL-W对血链球菌的MIC和MBC未检测出结果;对具核梭杆菌的MIC和MBC分别为0.0156mg/ml及0.0313mg/ml;对牙龈卟啉单胞菌的MIC和MBC分别为0.125mg/ml及0.500mg/ml。KSL对血链球菌的MIC和MBC未检测出结果;对具核梭杆菌的MIC和MBC分别为0.0156mg/ml及0.0313mg/ml;对牙龈卟啉单胞菌的MIC和MBC分别为0.125mg/ml及0.500mg/ml。结果表明人工合成抗菌肽Pac-525对各种菌在较低浓度都有抑制作用,KSL-W和KSL对血链球菌无抑制作用。二、抗菌肽Pac-525、KSL-W、KSL的细胞毒性实验抗菌肽Pac-525、KSL-W、KSL对MG63细胞相对增殖无较大影响,较阴性对照组,无统计学差异(P>0.05),存活率均在93%以上。三、抗菌肽Pac-525对纯钛表面牙龈卟啉单胞菌生物膜的影响浓度为1×106CFU/ml的牙龈卟啉单胞菌悬液,经48小时专性厌氧培养,扫描电镜证实能在光滑纯钛表面形成生物膜。CLSM下观察氯已定组与浓度为0.250mg/ml和0.500mg/ml的Pac-525作用后的牙龈卟啉单胞菌生物膜,死菌增多,生物膜厚度明显降低,生物膜厚度与阴性对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。浓度为0.125mg/ml Pac-525作用后的生物膜厚度与阴性对照组无统计学差异(P>0.05)。活死菌比率,经过单因素方差分析,(P<0.05),0.25mg/ml Pac-525处理组,0.5mg/ml Pac-525处理组和氯己定漱口液组与阴性对照组有明显统计学差异(P<0.01)。结论:1.抗菌肽Pac-525对血链球菌,具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌均有明显的抑菌作用。KSL-W和KSL对血链球菌的MIC不在测试浓度范围之中,但对具核梭杆菌及牙龈卟啉单胞菌有明显的抑制作用。Pac-525对三种菌株的MIC均小于KSL-W和KSL,说明本实验条件下,Pac-525对种植体周围炎主要致病菌的抑制作用较KSL-W和KSL好。2.抗菌肽Pac-525、KSL-W、KSL对MG63细胞均无细胞毒性。3.抗菌肽Pac-525对光滑纯钛表面牙龈卟啉单胞菌生物膜具有破坏作用,可以杀死生物膜中的大部分细菌,浓度为0.25mg/ml和0.500mg/ml的Pac-525对生物膜的清除能力较强。