目的：观察RH株弓形虫感染鼠血清在体外对小鼠黑色素瘤细胞(B16细胞)增殖以及凋亡的影响，进一步探讨弓形虫感染抑制肿瘤生长的机制。探讨紫外线辐照致弱RH株弓形虫速殖子的条件以及致弱弓形虫的生物学特性，为下一步以致弱速殖子抗肿瘤实验做准备。观察致弱RH株弓形虫速殖子诱导的免疫对C57BL/6J小鼠体内黑色素瘤生长的影响。　　方法：1将40只昆明小鼠随机分为8组，每组5只，分别经腹腔注射4×106/ml RH株弓形虫速殖子、生理盐水0.1ml，4天后心脏采血，分离血清。①不同浓度的感染鼠血清与B16细胞作用24h、48h，MTT实验检测OD值，计算细胞生长抑制率。②不同浓度感染鼠血清与B16细胞作用24h后，HE染色观察细胞形态，琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。　　2以253.7nm、30W紫外线灯作为辐照源在室温下辐照一定浓度的弓形虫速殖子，垂直照射距离为40cm，照射时间分别为0、1、3、5、10、20、30、40 min。①台盼蓝拒染法观察速殖子活力。②用辐照速殖子感染体外培养的B16细胞，观察辐照速殖子侵入细胞以及在细胞内增殖的情况。③辐照速殖子经腹腔接种小鼠，观察小鼠存活时间，判断其在小鼠体内增殖情况。④线粒体呼吸实验。⑤辐照5min RH株速殖子免疫小鼠，60天后用同株速殖子攻击，观察小鼠存活时间。　　3紫外线辐照致弱RH株弓形虫速殖子经腹腔接种免疫C57BL/6J小鼠二次，免疫间隔时间为7天。分别在第二次免疫的当天、免疫后7天和21天皮下注射B16细胞。于注射B16细胞21天后处死小鼠，测量肿瘤的体积、重量，计算抑瘤率，观察致弱速殖子免疫对小鼠体内黑色素瘤生长的影响。　　结果：1 RH株弓形虫感染鼠血清在体外对B16细胞效应的实验结果：①不同浓度感染鼠血清与B16细胞分别作用24h、48h，各实验组吸光度与对照组比较均具有显著性差异(P＜0.05)。不同浓度感染鼠血清作用24h，对B16细胞增殖的抑制率分别为8.75％、14.76%、23.37%；作用48h，对 B16细胞增殖的抑制率为14.94%、24.90%、40.13%。细胞增殖抑制率与感染鼠血清浓度和作用时间有关，随着血清浓度的增加和作用时间的延长，细胞增殖抑制率增加。②不同浓度感染鼠血清作用24h后，HE染色镜检可见B16细胞生长密度降低，细胞核出现浓染、核固缩；提取细胞DNA，琼脂糖凝胶电泳出现典型DNA梯形条带；流式细胞仪检测，对照组和10%、20%感染血清组的细胞凋亡率分别为5.5233±2.9579%、26.4933±3.8200%、44.7433±3.4807%，感染血清组与对照组细胞凋亡率比较具有显著差异(P＜0.05)，10%、20%感染血清组之间比较差异具有显著性(P＜0.05)。2紫外线辐照致弱弓形虫的实验结果：①未经辐照速殖子活力为99.0%，辐照30min速殖子活力为90.5%，随着辐照时间延长，速殖子活力略有下降。当辐照时间延长到40min时，速殖子全部失去活力。②辐照0～30min速殖子均能够侵入B16细胞。③辐照1min速殖子可以在B16细胞和小鼠体内增殖，小鼠平均存活时间为6天；辐照3～30min速殖子接种小鼠在30天实验观察期内全部存活，且在 B16细胞内无增殖。④与未经辐照的速殖子相比，辐照并没有影响速殖子的新陈代谢功能。⑤辐照速殖子免疫小鼠在受到攻击感染后存活时间为192±18h，对照组存活时间为144±15h，两组之间比较差异具有显著性(P＜0.05)。3致弱弓形虫免疫的抑瘤效应的实验结果：实验组小鼠肿瘤体积分别为1.02±0.35 cm3、1.30±0.33 cm3、1.45±0.29cm3，与对照组(2.07±0.78cm3)比较有显著差异(P＜0.05)。实验组肿瘤重量分别为0.8283±0.4311g、1.2417±0.3468g、1.5150±0.4890g，对照组肿瘤重量为3.3967±0.5881g，各实验组与对照组比较有显著差异(P＜0.05)，但各实验组之间比较无显著差异(P＞0.05)。各实验组抑瘤率分别为76.52%、63.45%、55.40%。　　结论：1 RH株弓形虫感染小鼠血清在体外能够抑制B16细胞增殖。　　2 RH株弓形虫感染小鼠血清在体外能够诱导B16细胞凋亡。　　3在本实验条件下，紫外线辐照3～30min即可致弱弓形虫，致弱弓形虫失去增殖能力，但活力和细胞侵入能力正常，并可以诱导一定的免疫保护力。　　4致弱RH株弓形虫速殖子在21天实验观察期内可以抑制小鼠体内黑色素瘤。