食品中诺沃克病毒和甲肝病毒检测的研究

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近年来,食源性病毒的传播正在日益受到人们的广泛关注.世界卫生组织已就不断上升的发病趋势发出警示.目前,报道最多的食源性病原体是NLV和HAV.NLV(Norwalk-like viruses)属于人类杯状病毒家族,但病毒表面无典型的杯状凹陷.随着分子生物学检测方法的不断发展,人们越来越清楚地认识到NLV是引起人类急性病毒性胃肠炎的主要病原体.据美国CDC报道,在美国,96﹪的急性非细菌性胃肠炎是由NLV感染引起的.另外,在美国,每年报道的HAV病历数是25000-35000人,其中5﹪的病历属于食源性感染.中国尚无NLV感染的确切统计数字,但曾多次发生因食用海鲜而感染HAV的事件.由于贝类可以通过滤过作用而将病毒富集,双壳贝类是最危险的污染源.其它一些食物,包括水果、蔬菜、三明治等也可能传播食源性病毒.因此,进行食品中NLV和HAV的检测对于控制食源性NLV和HAV传播非常重要.该文中,我们使用RT-PCR法进行了贝类、蔬菜和水果中NLV和HAV检测的研究.食品中病毒检测的难点是:缺乏有效的从食品中回收病毒的方法,食品中存在天然的RT-PCR抑制剂,食品中病毒的含量较低.对于NLV检测,要选择可同时扩增NLV基因Ⅰ型和Ⅱ型的引物.我们选用了289和290混合引物进行食品中NLV的检测,这一引物组合可同时检测Ⅰ型和Ⅱ型NLV,扩增出一个319bp的特异性片段.该文所建立的贝类样品中NLV和HAV检测方法的灵敏度与国外文献所报道的灵敏度基本相同.蔬菜和水果中NLV和HAV的检测灵敏度优于国外文献所报道的最低检出限.该文所建立的方法完全能够有效的进行贝类、蔬菜和水果中NLV和HAV的检测.这也是国内首次进行的食品中NLV的检测.
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