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目的研究功能性便秘(functional constipation,FC)患儿肠道菌群对大鼠体内酸敏感离子通道3(Acid-sensitive Ion Channel,ASIC3)表达的影响,并探讨ASIC3在肠道动力中的调控作用方法收集安徽医科大学第一附属医院2017年12月至2018年6月间符合罗马Ⅳ诊断标准的FC患儿和健康儿童的粪便,健康儿童粪便互相混合,FC患儿粪便互相混合,然后分别置于无菌搅拌器内,加入PBS(粪便:PBS=1:10)搅拌均匀后,依次通过孔径为2.0、1.0、0.5和0.25mm的滤网过滤,匀浆并离心后分离纯化得到粪菌液。所有大鼠均予抗生素混合物饮水(万古霉素200mg/Kg、甲硝唑200mg/Kg、新霉素200mg/Kg),隔天1次、共2周,构建伪无菌鼠模型。然后按照随机数字表法将伪无菌大鼠随机分为处理组和对照组,每组12只,处理组予FC患儿粪菌液、对照组予健康儿童粪菌液灌胃处理,每日1次,连续3d,以后隔天1次,共7次。两组大鼠各取6只,将每只大鼠单独放于一个鼠笼中,每隔1h收集一次粪便,记录粪便颗粒数并称重,将称重过后的粪便置于60℃烘箱中,12h后再次称重,测定粪便含水量;两组大鼠禁食不禁水16h后,分别给予活性炭灌胃(1.0m L/100g),准确计时,20min后水合氯醛麻醉,迅速打开腹腔,仔细分离肠系膜,剪取上端自幽门,下至回盲部的肠管,将肠管不加牵引平铺于玻璃板上,用刻度尺测量小肠中活性炭推进的距离,计算小肠推进率;另取6只大鼠,禁食不禁水16h后,乙醚轻度麻醉后,将直径约3mm的彩色塑料小珠经光滑的塑料棒经肛门推入大鼠远端结肠(距肛门约3cm),然后将大鼠单独放置于垫有白纸的笼中,记录从放入到排出小珠的时间,测定结肠动力;分别取各组大鼠6只,乙醚麻醉大鼠后,将8F导尿管一端用三通阀连接水银血压计,分别在20mm Hg、40mm Hg、60mm Hg、80mm Hg压力下进行AWR评分,并记录痛阈(AWR评分为3分时的压力),测定肠道敏感性;将各大鼠分别单独放于铺垫白纸的笼中,收集粪便后立即置于液氮中冷冻后,用16Sr DNA高通量测序法分别测定大鼠和FC患儿的肠道微生物;分别取大鼠幽门下5cm处小肠及直肠上2cm处结肠组织各1.5cm置于液氮中保存,用荧光定量PCR及Western-blot法测定肠道ASIC3 m RNA和蛋白质的表达。结果与对照组相比,处理组大鼠粪便含水量、小肠推进率、结肠动力及内脏敏感性均明显降低(P=0.017,P=0.005,P=0.043);FC患儿及FC粪菌植入伪无菌大鼠均有肠道菌群种类和数量减少(P=0.045,P=0.023),以厚壁菌门,拟杆菌门为主;处理组大鼠小肠ASIC3 m RNA和蛋白质表达明显下调(P=0.036,P=0.025),结肠组织中ASIC3 m RNA和蛋白质的明显表达下调(P=0.013,P=0.031)。结论FC患儿存在肠道菌群紊乱,且FC患儿肠道菌群可能通过下调大鼠肠道ASIC3的表达,影响肠道动力。