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目的:
1.明确实验性近视动物模型C57BL/6小鼠巩膜COL1α2基因mRNA水平的变化;
2.研究形觉剥夺性近视模型C57BL/6小鼠巩膜COL1α2启动子区域CpG岛甲基化水平的改变。
方法:
1.建立形觉剥夺性近视模型C57BL/6小鼠:C57BL/6小鼠72只23日龄,随机分为3组,单眼剥夺组:4周(n=48),形觉剥夺恢复组:(n=24)对侧眼作自身对照;正常组(n=36)。实验前后用红外偏心验光仪测量小鼠眼球的屈光度,实验结束后提取处理组的实验眼、处理组的对侧眼和正常对照组的对照眼的巩膜组织,每两只巩膜按照同一处理组内随机合并,提取基因组RNA和DNA,用以后续实验。
2.形觉剥夺性C57BL/6小鼠的近视形成期巩膜COL1α2 mRNA水平上的变化:36只C57BL/6小鼠随机分成3组:形觉剥夺组:单眼遮盖4周(n=24);形觉剥夺恢复组单眼遮盖4周恢复7天(n=24),年龄相匹配的正常对照组(n=24)。每组在实验结束后分别提取巩膜组织,处理组的实验眼、处理组的对侧眼和正常对照组的对照眼,按同一处理组内随机数字表每两只巩膜合并提取基因组RNA,real timePCR检测不同处理眼巩膜组织COL1α2 mRNA水平变化状况。
3.形觉剥夺性C57BL/6小鼠的近视形成期巩膜COL1α2启动子区域CpG岛甲基化水平的改变:36只C57BL/6小鼠随机分成2组:形觉剥夺组:单眼遮盖4周(n=24);年龄相匹配的正常对照组(n=12)。每组在实验结束后分别提取巩膜组织,处理组的实验眼、处理组的对侧眼和正常对照组的对照眼,按同一处理组内随机数字表每两只巩膜合并提取基因组DNA,经过亚硫酸盐处理后用通过克隆测序的方法检测不同处理眼巩膜组织COL1α2启动子区域和第一外显子区域CpG岛甲基化状况。
统计方法是用SPSS11.5软件统计,同一个小鼠属组内处理组的实验眼和处理组的对侧眼比较,采用配对t检验,不同小鼠属组间比较采用独立样本t检验。
结果:
1.形觉剥夺4周后,同一小鼠的实验眼相比其对侧眼向近视方向漂移P<0.05。
2.形觉剥夺4周,形觉剥夺眼和正常对照眼相比COL1α2 mRNA下降33.8%P=0.024(P<0.05),剥夺眼和对侧眼之间COL1α2 mRNA水平并没有明显的统计学差异,但有下降趋势。去除眼罩7天,实验性近视完全恢复。
3.形觉剥夺4周,形觉剥夺眼和正常对照眼COL1α2启动子区域CpG岛甲基化水平不存在明显差异,剥夺眼和对侧眼之间甲基化水平并没有明显的统计学差异;形觉剥夺眼,对侧眼和对照眼甲基化水平较剥夺4周未见明显变化。
结论:
1.小鼠单眼形觉剥夺4周可诱导出相对近视;利用相干光断层扫描仪测量小鼠眼球生物学参数可以较好反映屈光度的改变;
2.C57BL/6小鼠近视模型巩膜形觉剥夺眼和正常对照眼相比COL1α2 mRNA下降。形觉剥夺恢复组,实验眼和正常对照眼相比COL1α2 mRNA上升。
3.C57BL/6小鼠近视模型,巩膜COL1α2 mRNA表达量的改变与该基因启动子区CpG岛的甲基化状态无关。