鸡滑液支原体感染是由滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)引起的关节渗出性滑膜炎、滑液囊和腱鞘发炎为主要特征的急性或慢性传染性疾病,也可引起气囊炎,甚至导致全身感染,常常与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、大肠杆菌等致病微生物或混合感染。其膜上含有丰富的脂蛋白,称为脂质相关膜蛋白(Lipid associated membrane proteins,LAMPs),具有很强的免疫原性。同时脂蛋白易发生相位、抗原变异,造成支原体表面种类丰富多样化。虽然人们对支原体致病机理尚不明确,但越来越多的研究表明脂蛋白在其致病过程中扮演重要的角色。LP78蛋白是滑液囊支原体膜上的一种脂蛋白,具有很强的免疫原性。本研究首先参照GenBank中滑液支原体WVU1853株的LP78基因序列设计引物,以MS1853株的基因组作为PCR模板进行分段扩增LP78基因序列,然后以各分段产物作为模板进行LP78全长扩增,然后将获得的滑液支原体WVU1853株LP78基因克隆至原核表达载体pColdⅠ,酶切鉴定,测序并经点突变完成,密码子优化后,表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。采用冷休克表达系统,经IPTG诱导大量表达LP78蛋白,然后通过His-tag磁珠纯化的方法,进行LP78蛋白的纯化,以此获得较纯的LP78蛋白。本研究用纯化后的滑液支原体脂蛋白LP78基因原核表达产物对BALB/c小鼠进行腹部皮下多点免疫,取效价最高的小鼠脾脏与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,并通过多次杂交瘤细胞筛选的方法对融合后的细胞进行筛选,直至筛选出能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。采用间接ELISA和Western-blot检测方法对获得的单克隆抗体特异性进行检测。将获得的杂交瘤细胞反复冻融和传代,进行杂交瘤细胞稳定性检测。本研究成功制备了两株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株H5和C9。经过间接ELISA和Western-blot检测结果表明,2株单克隆抗体均可与滑液囊支原体发生特异性地结合,并且与禽类其他病原体不发生反应。稳定性检测表明,两株杂交瘤细胞株经过多次连续传代后,仍具有稳定分泌单克隆抗体的能力,具有很好的稳定性。经过单克隆抗体亚类鉴定试剂盒鉴定,两株单克隆抗体均为IgG 1,轻链均为κ轻链型。采用6-8周龄的雌性BALB/c制备腹水,采用HiTrapTM IgG Purification HP进行纯化腹水,经过SDS-PAGE凝胶电泳对纯化后的腹水进行化分析,可以看见53 kD左右的重链和23 kD左右的轻链两条明显的蛋白条带,结果表明其纯化的效果较好,经BCA蛋白浓度检测试剂盒方法测定得到两种单抗的浓度分别为1.019 mg/m L和1.1 mg/mL。本研究通过Overlap PCR的方法获得LP78全长,成功表达并纯化了重组LP78蛋白,并成功制备了2株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,为滑液囊支原体的诊断方法的建立提供了良好的材料,同时为深入研究脂蛋白LP78的生物学功能奠定了基础。