本研究通过探讨壳寡糖(COS)预保护对IPEC-J2细胞炎性损伤的保护机制,以期为COS作为饲料添加剂在养猪生产上的应用提供一定的理论参考。采用CCK-8法检测,脂多糖(LPS)浓度(0、250、500、1000、5000、10000 ng/m L)和COS浓度(0、25、50、100、150、200、250、300、400、600μg/m L)对IPEC-J2细胞作用6 h和24 h后,细胞增殖活性的变化。试验分为对照组(不添加COS和LPS)、COS组(50μg/m L)、LPS组(500 ng/m L)及COS预保护组(COS 50μg/m L+LPS 500ng/m L)。采用荧光定量PCR技术检测相关炎性细胞因子和紧密连接蛋白的相关基因表达量。采用Western blot技术测定髓样分化蛋白88(My D88)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(Pho-p38MAPK)、C-Jun氨基末端激酶(JNK)、IκB激酶(IKK)β、核因子κB(NF-κB)信号传导通路的蛋白表达量。结果显示不同浓度的LPS作用6 h后均可降低IPEC-J2细胞活力,并且当LPS浓度达到100 ng/m L时,明显抑制细胞增殖(P<0.01);在LPS浓度为500 ng/m L时,IPEC-J2细胞活力极显著降低至62.7%(P<0.01)。当COS浓度在50～250μg/m L时,对IPEC-J2细胞增殖具有促进作用(P<0.01),且在浓度为50μg/m L时,对细胞的促进作用最明显,细胞活力可达127.5%。与对照组相比,LPS对紧密连接蛋白-1(ZO-1)mRNA表达无影响(P>0.05),COS预保护可上调ZO-1 mRNA表达(P<0.05)。与对照组相比,LPS显著降低黏蛋白MUC2 mRNA表达水平(P<0.01),COS预保护可缓解LPS对MUC2mRNA的表达量下调(P>0.05)。与对照组相比,LPS显著增加Toll样受体4(TLR4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达(P<0.01)。与LPS相比,COS预保护可缓解LPS对TLR4和TNF-αmRNA表达量上调(P<0.01)。与对照组相比,LPS显著上调My D88、p38MAPK、Pho-p38MAPK、JNK、IKKβ、NF-κB蛋白表达(P<0.01)。COS预保护显著缓解LPS对NF-κB蛋白的表达量上调(P<0.01)。研究发现COS预保护条件下可缓解LPS诱导IPEC-J2细胞物理屏障中ZO-1 mRNA;可显著缓解LPS诱导IPEC-J2细胞化学屏障中MUC2 mRNA和免疫屏障中TLR4、TNF-αmRNA的表达下调量(P<0.01);缓解LPS诱导的My D88、p38MAPK、Pho-p38MAPK、JNK、IKKβ、NF-κB蛋白表达量上调。表明COS预保护条件下的抗炎作用是通过TLR4、M y D88、MAPK和IKKβ途径,抑制NF-κB信号通路的激活,减少炎症因子的释放,提高肠道紧密连接蛋白、黏蛋白基因表达,抑制LPS诱导的炎性反应。