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目的：原发性肝癌是临床上常见的消化系统恶性肿瘤之一，严重威胁着我国人民的健康。由于肝癌的早期诊断困难，大多数肝癌患者确诊时已属晚期，能够手术治疗的病人术后也易于复发。因此，全身化疗成为晚期肝癌主要治疗手段之一。其中，5－氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）是晚期肝癌化疗的主要药物，然而临床疗效仍不乐观。治疗失败的主要原因在于肝癌获得性耐药性的产生。因此，深入研究5-FU在肝癌细胞中的耐药机制具有重要的临床意义。本研究通过建立人肝癌细胞株SMMC-7721的5-FU耐药细胞模型SMMC-7721/5-FU，并以蛋白质组学方法鉴定了耐药细胞与亲本细胞之间的的差异表达蛋白质，筛选了可能与5-FU获得性耐药有关的蛋白质，并进一步考察了感兴趣的目标蛋白质在5-FU获得性耐药机制中的作用。方法：利用2-DE（two-dimensional electrophoresis,双向电泳）和MALDI-TOF MS（Matrix-assisted laser desorption/Ionization Time-of-Flight,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱）蛋白质组学方法，对人肝癌细胞株SMMC-7721亲本和耐药细胞SMMC-7721/5-FU的蛋白质表达谱进行分析，检测出亲本和耐药细胞株之间差异表达蛋白质。并用Semi-RT-PCR(semi-quantitative reverse transcription andpolymerase Chain reaction,半定量反转录－聚合酶链反应)和Western blot(蛋白质印迹法)方法在基因和蛋白质表达水平上对蛋白质组学结果进行验证。然后利用小干扰RNA瞬时敲除SMMC-7721/5-FU中感兴趣的目标基因，考察该基因对5-FU生物学活性的影响。结果：在人肝癌细胞株SMMC-7721亲本和耐药株SMMC-7721/5-FU之间检测出102个表达差异的蛋白质，其中79个表达上调（如：HSP27、PRDX6、PHB、PSMB7、MYL6、HNRNPL），23个表达下调（如：Maspin、HN1、P16、MTAP）。并通过Semi-RT-PCR和Western blot方法验证了蛋白质组学结果。对SMMC-7721/5-FU中异常高表达的PRDX6、PSMB7两个基因进行瞬时沉默后，SMMC-7721/5-FU对5-FU的敏感性明显增加。结论：5-FU在肝癌细胞中的获得性耐药与一组基因异常表达有关，下调PRDX6、PSMB7的表达能部分克服5-FU在肝癌中的耐药性。