MicroRNAs(miRNAs)是真核生物基因组中一类长度在19-24nt的，依赖序列特异性的基础的调控分子，它们可以在转录后水平介导基因沉默。在真核生物中比miRNA更加广泛存在的是siRNA，它们不仅可以介导转录后沉默，还可以介导转录水平的基因沉默。　　 在拟南芥中，miR396家族包含miR396a和miR396b，它们分别由两个不同的基因MIR396a和MIR396b编码。GRF(growth-regulating factors)是由9个同源基因构成的一个转录因子家族，其中GRF1，GRF2，GRF3，GRF4，GRF7，GRF8和GRF9是miRNA396的靶基因，GRF通过控制细胞的分裂(数目)而对叶片的发育起作用。miR396通过对GRF进行转录后水平的抑制，控制GRF的表达部位，参与对叶片发育的调控。　　 本研究中，为了探索miR396在拟南芥发育中的生物学功能，通过构建35S：MIR396a和35S：MIR396b载体，获得了过量表达MIR396a和MIR396b转基因拟南芥株系。35S：MIR396a和35S：MIR396b转基因株系都出现了叶片明显小于野生型的表型。除了叶表型外，35S：MIR396a根长明显短于野生型，显微观察发现35S：MIR396a分生区结构明显异于野生型，而35S：MIR396b根长与野生型无明显的差异。通过对MIR396a和MIR396b及GRF的启动子报告基因株系的GUS染色，我们发现MIR396和GRF在根部都有明显的表达。根据MIR396与GRF的表达部位，我们推测MIR396对同一家族不同GRF成员有不同的调控模式。35S：MIR396a、35S：MIR396b转基因株系及野生型根部GRF表达量分析证实了miR396能下调GRF转录本水平。由于grf突变体都未出现根表型异常，说明miR396对GRF的调控作用并非短根表型出现的原因。　　 miR396a与miR396b只有一个碱基的差异存在于3’末端，而这种差异一般认为不会对它们靶基因的选择及降解作用产生影响，因而我们推测35S：MIR396a和35S：MIR396b转基因株系根表型的不同可能与MIR396茎环部分有关。通过miR396a和miR396b成熟体的互换，我们构建了35S：preMIR396a-b(MIR396a茎环接上miR396b成熟体)，35S：preMIR396b-a(MIR396b茎环接上miR396a成熟序列)转基因株系。发现绝大多数35S：preMIR396a-b都表现出根发育情况类似于35S：MIR396a，而35S：preMIR396b-a转基因株系根表型与野生型无差异。该结果表明MIR396a茎环部分可能是短根表型出现的重要原因，也证实了MIR396a过量表达会导致短根表型的出现。　　 最近的研究发现，许多经典的MIR基因可以产生siRNA，对sRNA的深度测序表明这类sRNA与经典的miRNA一般只有左右几个碱基的摇摆。据此，我们在small RNA数据库中搜索MIR396a相关的miRNA及siRNA，并利用psRNATarget软件预测其可能的靶基因，结果发现了一个来源于MIR396a与miR396序列相近的小RNA(sRNA14117)，与ATIG10120可以进行很好的配对。5RACE实验表明，AT1G10120与sRNA14117/miR396在配对位点(相对于sRNA141175’端第13个碱基，相对于miR3965’端第10个碱基)发生剪切，因而证实了ATIG10120是MIR396一个新的靶基因。