一、研究目的及意义：绿豆癀是绿豆的加工制品，主产于台湾中南部山区，在台湾全岛被广为使用，认为功同绿豆，效果比绿豆更佳。本研究对台湾民间常用绿豆癀的加工方法、功效主治和使用经验进行系统整理，为规范其运用奠定基础；初步阐明绿豆癀的护肝、解毒作用及其机制，阐明绿豆癀的营养成分及化学成分，揭示其护肝、解毒作用的物质基础及其机制，为绿豆的开发利用拓宽途径，为市场提供一作用机制、物质基础明确的保健食品提供科学依据。二、研究方法：1、药理试验研究以下主要选用了五大试验来评估绿豆癀的解毒和降脂作用，并探讨其部分作用机制。其中绿豆癀用双蒸水配制成浓度分别为0.15g／ml、0.075g／ml、0.375g／ml的高、中、低三个剂量的溶液；绿豆粉用双蒸水配制成浓度2.0g／ml绿豆粉溶液。用以比较绿豆癀作用是否优于绿豆粉，以及绿豆癀不同于绿豆粉的作用。（1）绿豆癀抗CCl₄肝损伤作用的实验研究将60只小鼠随机分为6组：正常对照组、模型组、绿豆粉组和绿豆癀高、中、低剂量组，每组10只，雌雄各半。正常对照组和模型组每天用0.5ml饮用水灌胃；绿豆粉组每天用0.5ml绿豆粉溶液灌胃：绿豆癀高、中、低剂量3组每天各用相应浓度绿豆癀溶液分别给0.5ml灌胃。正常喂养，连续实验7d，待末次给药后1h，除正常对照组腹腔注射0.2ml生理盐水外，其余各组按10.0ml／kg体重的剂量（约0.2ml）腹腔注射0.125％CCL₄花生油溶液．然后禁食不禁水，20h后摘眼球取血处死，血液静置3h，待凝固后分离血清，3000rpm离心10min，取上清液注入EP管，-20℃保存，按试剂盒说明书，用分光光度计分别测定AST及ALT；取部分肝右叶，用10％甲醛固定，常规石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察肝组织形态学变化。（2）绿豆癀抗酒精性肝损伤作用的实验研究将60只小鼠随机分为6组：正常对照组、模型组、绿豆粉组、绿豆癀高、中、低剂量组，每组10只，雌雄各半。正常对照组和模型组每天用0.5ml饮用水灌胃；绿豆粉组每天用0.5ml绿豆粉溶液灌胃，绿豆癀高、中、低剂量3个组每天各用相应浓度绿豆癀溶液分别给0.5ml灌胃，每日1次，共12次，正常喂养。最后一次灌胃后13h，除正常对照组灌胃0.3ml饮用水外，其余各组均灌胃0.3ml的50％乙醇造模。小鼠在造模后禁食不禁水，10h后脱臼处死小鼠，迅速取出肝脏，用冷生理盐水沖洗，滤纸吸干，称取0.3g，加入预冷生理盐水3ml，制备成10％的匀浆液，4500 rpm离心10min，取上清液注入试管，-20℃保存。按照试剂盒说明书的方法测定肝组织内GSH、MDA、TG含量；另取部分肝右叶，用10％甲醛固定，常规石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察肝组织形态学变化。（3）绿豆癀调节血脂作用的实验研究参照文献方法，用1％胆固醇，0.12％甲基硫氧嘧啶，0.13％胆盐，7.75％猪油，10％蛋黄粉，81％基础饲料制成高脂饲料；绿豆粉和绿豆癀均加工成颗粒饲料。将60只Wistar大鼠随机分为6组：正常对照组，模型组，绿豆粉组，绿豆癀高、中、低剂量组，每组10只，雌雄各半。绿豆粉组和绿豆癀高、中、低剂量组大鼠每只一个笼子单独喂养。大鼠食量按25g／天／只计算，正常对照组喂普通饲料；模型组大鼠每只每天喂高脂饲料17.5g+普通饲料7.5g；绿豆粉组大鼠每只每天喂高脂饲料17.5g+5g绿豆粉+普通饲料2.5g；绿豆癀低剂量组大鼠每只每天喂高脂饲料17.5g+绿豆癀2.5g+普通饲料5g；绿豆癀中剂量组大鼠每只每天喂高脂饲料17.5g+绿豆癀5g+普通饲料2.5g；绿豆癀高剂量组大鼠每只每天喂高脂饲料17.5g+绿豆癀7.5g。连续40天。末次喂饲后，禁食12h，腹主动脉取血，血液静置3h，待凝固后分离血清，3000rpm离心10min，取上清液注入EP管，-20℃保存，按试剂盒说明书，用分光光度计分别测定TG、LDL-C、HDL-C值。（4）绿豆癀对肝GSH、GST影响的实验研究待动物适应环境1周后，将60只动物按体重随机分为6个组：空白对照组，泼尼松龙组，绿豆粉组和绿豆癀高、中、低剂量组，每组10只，雌雄各半。空白对照组和泼尼松龙组每天用0.5ml饮用水灌胃；绿豆粉组每天用0.5ml绿豆粉液灌胃；绿豆癀高、中、低剂量3组每天用相应浓度绿豆癀液0.5ml灌胃。正常喂养，连续15d，除空白对照组外，其余各组从灌胃第8天开始每天皮下注射泼尼松龙（PSL）15mg／kg，连续5d。小鼠在末次给药后，摘眼球取血处死，离心分离血清，取肝脏用Tris-HCl 50 mmol／L（pH 7.4）制成25％肝匀浆，差速离心法制备微粒体及线粒体，-30℃保存。谷胱甘肽（glutathione，GSH）含量按Ellman法测定，谷胧甘肽还原酶（gutathionereductase，GSH-Re）活性依文献及试剂盒规定方法测定。（5）绿豆癀对肝CYP同功酶影响的实验研究将动物按体重随机分为5个组：空白对照组、绿豆粉组和绿豆癀高、中、低剂量组，每组10只，雌雄各半。空白对照组每天用0.5ml生理盐水灌胃；绿豆粉组每天用0.5ml绿豆粉液灌胃；绿豆癀高、中、低剂量3组每天各用相应浓度绿豆癀液0.5ml灌胃。正常喂养，连续10d。10天后断头处死，取肝脏，按照钙沉淀法制备微粒体。肝微粒体制备：将肝组织制备成20％的匀浆，按每克肝组织加4m10.25mol／L蔗糖溶液或pH7.5TMS缓冲液（Tris，HCl、MgCl₂）及蔗糖，磨成匀浆。将组织匀浆置低温高速离心，12000g，30分钟，以沉淀未破碎的细胞、细胞碎片、核及线粒体。所得上清液即线粒体后上清液，小心倒出上清液，备用。取适量线粒体后上清液加CaCl₂液（终浓度8mmol／L），稍搅拌混合，放冰浴5分钟，高速离心机27000×g离心15分钟。用Lowry比色法测定肝微粒体的蛋白含量，用牛血清蛋白质做标准曲线，光谱测定P450含量，消光系数为105mmol（L.cm），按照文献方法测定细胞色素P450（CYP）含量、7-乙氧异恶唑-O-脱乙基酶（EROD）、苯胺羟化酶（ANH）、红霉素N-脱甲基酶（ERD）的活性。2、药学试验研究（1）绿豆癀中蛋白质的测定；2)绿豆癀中氨基酸的测定；（3）绿豆癀中不溶性膳食纤维的测定；（4）绿豆癀中核黄素的测定；（5）绿豆癀中胡萝卜素的测定；（6）绿豆癀中硫胺素的测定；（7）绿豆癀中烟酸的测定三、研究结果1、药理试验结果（）绿豆癀抗CCl₄肝损伤作用的实验结果AST、ALT：与正常对照组相比，模型组小鼠血清AST、ALT含量均明显升高（P＜0.01），表明CCl₄肝损伤造模成功。绿豆癀低、中剂量能抑制小鼠血清AST的升高（P＜0.05），绿豆粉和绿豆癀高剂量均能抑制小鼠血清AST升高，但与模型组相比无统计学意义；绿豆粉和不同剂量的绿豆癀均能抑制小鼠血清ALT的升高（P＜0.01或P＜0.05）；而绿豆癀低剂量组比绿豆粉组有更好的效果（P＜0.05）。肝组织病理：与正常对照组相比，模型组小鼠肝细胞气球样变、脂肪变性、胞浆凝聚、肝细胞坏死均多于正常对照组，尤其是后者，模型组与正常对照组有明显差异（P＜0.01），绿豆癀高剂量组的肝细胞坏死程度比模型组轻，两者有显著差别（P＜0.05）。但各治疗组小鼠肝细胞气球样变、脂肪变性、胞浆凝聚、肝细胞坏死与模型组相比无统计学意义。（2）绿豆癀抗酒精性肝损伤作用的实验结果TG、MDA、GSH：与正常对照组相比，模型组TG、MDA均明显升高，GSH明显降低（P＜0.01或P＜0.05），表明成功复制出小鼠酒精肝损伤模型。绿豆粉和绿豆癀各剂量均能降低MDA，但与模型组相比无统计学意义；绿豆粉和绿豆癀各剂量均能升高GSH，但只有绿豆粉和绿豆癀低剂量组与模型组相比，有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。绿豆粉和绿豆癀各剂量均能降低TG，但只有绿豆粉和绿豆癀中剂量组与模型组相比，有统计学意义（P＜0.01）。肝组织病理：与正常对照组相比，模型组小鼠肝细胞脂肪变性明显多于正常对照组（P＜0.01）。各治疗组小鼠肝细胞脂肪变性与模型组相比明显减少（P＜0.01）。（3）绿豆癀调节血脂作用的实验结果TG、LDL-C、HDL-C：与正常对照组相比，模型组TG、LDL-C均明显升高，HDL-C明显降低（P＜0.01），表明成功复制出大鼠高脂血症模型。绿豆粉和绿豆癀低、中剂量虽能降低LDL-C，但与模型组相比，无统计学意义，绿豆癀高剂量能明显降低LDL-C（P＜0.01），而且其效果明显比绿豆粉组高（P＜0.05）；绿豆粉和绿豆癀各剂量均能明显降低TG、升高HDL-C（P＜0.01或P＜0.05），绿豆癀中、高剂量的效果更佳，与绿豆粉相比有明显差异（P＜0.01）。（4）绿豆癀对肝GSH、GST影响的实验结果泼尼松龙组GSH比空白对照组明显降低（p＜0.01）。绿豆粉组和绿豆癀三组GSH降低均比泼尼松龙组小（p＜0.05或p＜0.01）。绿豆癀组尤以高剂量下降最小，中剂量次之，高剂量与绿豆粉比较有明显差异（p＜0.01）。绿豆癀的高剂量组可以提高GSH—Re的活性。（5）绿豆癀对肝CYP同功酶影响的实验结果绿豆粉和绿豆癀3组均可使小鼠肝线粒体CYP含量明显升高（p＜0.01），尤以绿豆癀高剂量组作用最强，其与绿豆粉组相比，亦有明显差异（p＜0.05）。从表8可以看出，绿豆癀中、高两组CYP同功酶EROD和ANH的活性明显下降，而ERD的活性明显升高（p＜0.01或p＜0.05），尤以高剂量组作用更强。2、绿豆癀化学及营养成分测定的实验结果绿豆癀中蛋白质含量略低于绿豆粉，但无显著的统计学差异；绿豆癀中氨基酸含量、不溶性膳食纤维、核黄素、胡萝卜素、硫胺素和烟酸含量均高于绿豆粉组。四、结论提示绿豆癀有较好的护肝解毒作用和较明显的降血脂作用。其作用机制除了一般的抗氧化作用外，还可能与调节CYP酶系中不同酶的活性有关。在实验中，还设立了绿豆粉组作对照。在各实验组中，绿豆粉与绿豆癀有相似的作用，但总的看来，作用比绿豆癀低。在本研究中，还对绿豆癀的多项化学及营养成分进行了测定。结果是绿豆癀中所含多项氨基酸、不溶性膳食纤维、核黄素、胡萝卜素、硫胺素及烟酸等各类化学及营养成分较绿豆粉明显为高。本研究的创新点是：（1）对台湾民间常用的绿豆癀的加工方法、功效主治和使用经验进行了较系统整理；（2）通过多种动物模型和多项指标（尤其是肝药酶指标）探讨了绿豆癀的护肝、解毒的药理作用及其机制；（3）初步阐明绿豆癀的营养成分及化学成分，揭示其护肝、解毒作用的部分物质基础。