人工感染IBV与炎症体活化相关因子表达的研究

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炎症体是一类由多种蛋白组成的蛋白质复合体,主要包括NLRP1(NLR family, Pyrin Domain Containing1)、 NLRP3、 NLRP4和AIM2(Absent In Melanoma2)四种,其中NLRP3炎症体与病毒感染的识别关系密切。研究表明NLRP3炎症体通过激活白介素-1β (Interleukin-1β,IL-1β)和白介素-18(Interleukin-18,IL-18)参与机体固有免疫的调节,激活机体对感染和损伤做出反应,在固有免疫中起着非常重要的作用。因此,研究炎症体对机体固有免疫以及相关疾病的研究具有重要的意义。本研究通过人工感染IBV(Infectious Bronchitis Virus),用荧光定量RT-PCR (Quantitative Reverse Transcription PCR, qRT-PCR)对炎症体4个相关基因的表达进行检测,并分析了炎症发生过程中炎症体相关因子表达的变化。主要内容如下:首先,建立了与炎症体4个相关的基因NLRP3、 caspase-1、 IL-1β和IL-18qRT-PCR检测方法,所建立的标准曲线相关系数高、扩增效率为100%左右,且重复性好。其次,体外培养鸡胚气管环感染传染性支气管炎病毒(IBV)野毒株GX-YL5和弱毒疫苗株H120,在感染后(DPI)的0d、1d、2d、3d、5d和7d分别收集气管环提取RNA,对炎症体4个相关基因的qRT-PCR检测。结果表明,感染野毒株GX-YL5组与H120组、对照组相比,NLRP3基因的表达显著上调(P<0.05),caspase-1、IL-1β和IL-18基因的则无显著差异(P>0.05)。最后,利用IBV野毒株GX-YL5和弱毒疫苗株H120感染雏鸡,在DPI0d、1d、3d、7d、14d和21d分别采集其气管提取总蛋白和总RNA,同时进行caspase-1酶活性分析以及用qRT-PCR检测炎症体4个相关基因和IBV载量。结果表明,气管组织中IBV的载量在感染后逐渐上升,至DPI7d达到峰值,然后逐渐下降;caspase-1酶的活性和NLRP3的表达在DPI Id-3d先上升,然后在DPI7d下降至最低值,然后又逐渐上升;IL-1p和IL-18的表达在DPI1-7d出现波动起伏,但均在感染的中后期(IL-1p在DPI14d, IL-18在DPI21d)出现高峰。本研究结果表明,IBV病毒感染初期激活了NLRP3炎症体,从而导致了炎症反应,能够刺激caspase-1和IL-1β、IL-18等细胞因子表达量的上调,与机体获得性免疫协同将病毒从局部清除。
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