【摘 要】
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目的:1.明确SHH、FAK、ERK蛋白在h SOD1小鼠中表达量与正常小鼠的差异;2.确定在h SOD1小鼠中SHH与FAK、ERK存在上下游关系;3.验证SHH可以通过FAK/ERK通路对h SOD1模型的肌萎缩侧索硬化小鼠发挥保护作用。方法:1.应用免疫组织化学染色、Western blot方法,选择h SOD1基因阳性的雌鼠作为h SOD1组,选择同窝h SOD1基因阴性的雌鼠作为空白组,
【基金项目】
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“山西省应用基础研究计划项目（编号:201901D211500）”； 山西省高等学校科技创新项目（编号:2019L0434）；
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目的:1.明确SHH、FAK、ERK蛋白在h SOD1小鼠中表达量与正常小鼠的差异;2.确定在h SOD1小鼠中SHH与FAK、ERK存在上下游关系;3.验证SHH可以通过FAK/ERK通路对h SOD1模型的肌萎缩侧索硬化小鼠发挥保护作用。方法:1.应用免疫组织化学染色、Western blot方法,选择h SOD1基因阳性的雌鼠作为h SOD1组,选择同窝h SOD1基因阴性的雌鼠作为空白组,在出生后90天、120天、150天分别取脊髓组织进行SHH、FAK、ERK蛋白表达量检测。2.将鉴定明确的h SOD1基因阳性的雌鼠在出生后90天分别注射SHH激动剂Purmorphamine（PUR）、SHH抑制剂Cyclopamine（CYC）,取小鼠脊髓组织进行免疫组织化学染色、Western blot检测SHH、FAK、ERK蛋白表达情况。3.分别取空白组、h SOD1组、PUR（激动剂）组以及CYC（抑制剂）组小鼠后肢肌肉组织进行HE染色,观察肌肉形态、肌纤维数目。空白组、h SOD1组、PUR组与CYC组每周进行悬挂实验及体重记录。结果:1.Western blot结果显示:与空白组相比,SHH、FAK、ERK、p-FAK、p-ERK在h SOD1组表达量下降,且随着时间进行性降低（P＜0.05）。免疫组织化学染色结果显示:与空白组相比,SHH、FAK、ERK在h SOD1组脊髓前角细胞中表达量降低,且随时间进行性降低（P＜0.05）。2.Western blot结果显示:与h SOD1组相比,PUR组SHH、FAK、ERK、p-FAK、p-ERK蛋白含量增加,而CYC组相较于h SOD1组SHH、FAK、p-FAK蛋白明显降低,ERK、p-ERK蛋白降低无统计学意义。免疫组织化学染色结果显示:与h SOD1组相比,PUR组SHH、FAK、ERK脊髓前角细胞中表达量增加,而CYC组相较于h SOD1组SHH、FAK在脊髓前角细胞中表达量明显降低,ERK的降低无统计学意义。3.HE染色结果显示:PUR组较h SOD1组肌肉形态更为饱满,肌纤维数目增多,而CYC组较h SOD1组肌肉形态萎缩,肌纤维数目减少。与h SOD1组相比,PUR组体重减轻得更慢、力量更强;而CYC组相较于h SOD1组体重减轻更快、力量更弱。结论:1.SHH、FAK、ERK蛋白在h SOD1小鼠脊髓中表达量降低;且随着时间进行性降低。2.在h SOD1小鼠脊髓组织中SHH、FAK、ERK可能存在上下游关系,PUR可以激活SHH蛋白,增强FAK/ERK的功能。3.SHH可能通过FAK/ERK通路对h SOD1小鼠的肌肉组织发挥保护作用。
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