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研究目的:
乳腺癌(Breast Cancer, BC)是女性最常见的恶性肿瘤之一，已成为全球范围内发病率最高的女性恶性肿瘤之一。和其它实体瘤相似，乳腺癌也具有很强的远处转移的倾向，如转移到肺、肝和骨等部位。Tudor-SN(tudor staphy-lococcalnuclease)蛋白表达于乳腺上皮细胞，主要分布于胞浆内质网和细胞器中。Ho J等学者根据质谱分析技术对小鼠乳腺癌转移模型进行分析，并结合临床转移性乳腺癌组织标本，发现转移性乳腺癌组织中高表达Tudor-SN蛋白。但是Tudor-SN蛋白如何影响乳腺癌的生物学行为，及相关的分子机制不清楚。
本课题的研究目的旨在建立人类Tudor-SN蛋白表达抑制MDA-MB-231稳定株，揭示Tudor-SN蛋白对高转移乳腺癌细胞生物学的影响及相关机制的初探，从而为乳腺癌的诊断和治疗提供一定的实验依据。
研究方法:
本课题分为三个部分进行研究:第一部分，应用lipofectamine-2000转染试剂将质粒pGenesil-shRNA-hTudor-SNI转染高转移性人乳腺癌细胞系MDA-MB-231，G418筛选阳性克隆。第二部分Tudor-SN蛋白对乳腺癌细胞生物学行为的影响，分别应用Transwell小室体外侵袭实验、伤口愈合实验等，观察Tudor-SN蛋白稳定抑制表达细胞株和MDA-MB-231细胞体外侵袭能力、迁移能力的差异。第三部分，应用实时荧光定量PCR方法检测Tudor-SN蛋白稳定抑制表达细胞株和MDA-MB-231细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA水平影响，及小鼠乳腺癌组织稳定抑制表达组和未处理组MMP-2和MMP-9 mRNA水平的影响。
研究结果:
①第一部分通过倒置荧光显微镜肉眼观察并挑选出生长状态好、荧光强的单克隆细胞株。经PCR技术及western技术鉴定，pGenesil-shRNA-hTudor-SNI转染组细胞Tudor-SN mRNA及蛋白表达量均明显低于pGenesil-shRNA-HK阴性对照组细胞和/或未转染的对照组细胞，显示pGenesil-shRNA-hTudor-SNI稳定株细胞筛选成功。
②第二部分结果表明:(1) pGenesil-shRNA-hTudor-SNI转染组细胞侵袭能力低于未转染的对照组细胞;(2) pGenesil-shRNA-hTudor-SNI转染组细胞迁移能力低于未转染的对照组细胞。
③第三部分结果表明:实时荧光定量PCR技术鉴定，Tudor-SN稳定表达抑制细胞株中MMP-2 mRNA水平低于未转染的对照组细胞， MMP-9 mRNA水平高于未转染的对照组细胞;小鼠乳腺癌组织Tudor-SN抑制组MMP-2mRNA低于未处理组，MMP-9 mRNA水平高于未转染的对照组细胞，细胞和组织水平结果一致。
结论:
①成功筛选出pGenesil-shRNA-hTudor-SNI稳定抑制表达MDA-MB-231细胞株。
②Tudor-SNI稳定表达抑制组细胞与空白对照组细胞相比，体外侵袭能力和迁移能力降低，Tudor-SN对乳腺癌细胞的体外侵袭能力和迁移能力具有促进作用。说明Tudor-SN可能与乳腺癌细胞侵袭能力和迁移能力有关。
③Tudor-SN可以上调人乳腺癌细胞和小鼠乳腺癌组织MMP-2 mRNA水平，下调人乳腺癌细胞和小鼠乳腺癌组织MMP-9mRNA水平，为进一步研究Tudor-SN对乳腺癌侵袭和转移过程中的分子机制提供实验依据。