研究背景随着社会的发展和生活方式的变化,我国心血管疾病及糖尿病的发病率、死亡率不断攀升。糖尿病心肌病,是糖尿病心血管重要并发症,是指确诊糖尿病,并排除继发于高血压、冠心病及其余心脏病变的心肌疾病。该病在胰岛素抵抗及微小血管纤维化的基础上,进展为心力衰竭。因此,发现合适的防治靶点、有效的治疗药物,是一项重要的课题。β-羟丁酸是一种产自肝脏的脂肪酸,是人体内已存在的物质。根据相关文献报道,外源性补充β-羟丁酸,可产生抗炎、抗氧化、抗衰老等保护作用,可改善糖尿病性视网膜病变、动脉粥样硬化、阿尔茨海默症等疾病。但β-羟丁酸对糖尿病心肌病的作用尚不明确。自噬是指将细胞内大分子物质,传递至溶酶体进行降解,实现细胞本身的代谢需要和细胞器的更新,维持细胞内环境的稳定。自噬体的形成、向溶酶体的运送,和在溶酶体内消化的过程,称为自噬流。研究表明,糖尿病心肌病中的自噬流受损,导致线粒体功能障碍和脂质积聚。增强自噬、促进自噬流可以改善糖尿病心肌病,并延缓疾病发展进程。因此,我们提出猜测:β-羟丁酸通过促进自噬流改善高糖心肌细胞损伤。研究目的1.通过建立SD乳鼠原代心肌细胞的高糖培养模型,在细胞水平明确β-羟丁酸在糖尿病心肌病中的保护作用;2.探究β-羟丁酸对高糖心肌细胞损伤的保护机制及与调控自噬流的关系。研究方法本实验以SD乳鼠原代心肌细胞作为研究对象,通过胰酶+胶原酶消化法分离和提取后,进行心肌细胞鉴定。利用高糖培养模型,从而模拟糖尿病心肌病的内环境状态。首先分组如下:对照组、高糖组、高糖+各浓度梯度的β-羟丁酸组,通过MTS法检测心肌细胞存活率,确定最佳药物浓度。随后实验分组如下:对照组、高糖组、高糖+β-羟丁酸组,使用脂质氧化物检测试剂盒、活性氧检测试剂盒、线粒体膜电位检测试剂盒评估β-羟丁酸的心肌保护作用,并通过蛋白免疫印迹分析评估自噬相关分子水平。最后加入高糖+β-羟丁酸+氯喹组,重复上述实验。研究结果1.成功提取并培养心肌细胞2.β-羟丁酸改善高糖心肌细胞损伤3.β-羟丁酸促进高糖心肌细胞的自噬流4.β-羟丁酸改善高糖心肌细胞损伤的作用被自噬抑制剂氯喹拮抗5.β-羟丁酸促进高糖心肌细胞自噬流的作用被氯喹拮抗结论β-羟丁酸通过促进自噬流,减少心肌细胞氧化应激和凋亡,改善高糖心肌细胞损伤。