凝血酶(Thrombin EC 3.4.21.5)是机体凝血系统中的一种天然的成分,是一种在血液凝固系统中起重要作用的丝氨酸蛋白水解酶。它能直接作用于血中的纤维蛋白原,水解血液中纤维蛋白原的4个Arg-Gly肽键,产生不溶性的纤维蛋白,使血液变成凝胶而发生凝固。凝血酶广泛应用于医药行业中,可以用在局部止血,还可以和纤维蛋白原合用组成医用粘合剂用于治疗假性动脉瘤等疾病。以新鲜兔血液为原料,经过离心分离、冻融除杂、柠檬酸钡吸附获得粗酶液、再经激活、透析、冷冻干燥后进行DEAE-琼脂糖离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析,分离纯化出电泳纯的凝血酶,兔凝血酶纯化倍数为41.18倍,比活性为150.71U／mg,回收率为16.49%。兔凝血酶分子量约为35KD,最适pH为7.4,在pH6-8范围内相对稳定。最适温度为38℃,在50℃活性迅速丧失。Zn2+、Cu2+对凝血酶稍有激活作用,Mn2+、Mg2+有轻微的抑制作用,而Fe2+有较强的抑制作用,Li+、K+、Na+等离子对该酶活性基本无影响。异丙醇,乙二醇、乙醇有较强的抑制作用,甲醇对凝血酶影响很小。碘伏(2%)对凝血酶活性有较大的影响,戊二醛(1%)对凝血酶有一定的抑制作用,复方乙醇消毒液对酶活性几乎没有影响,75%消毒酒精,医用过氧化氢溶液(3%),云南白药气雾剂等其他外用医药试剂对酶活性有轻微抑制作用。在一定条件下分别用苯甲基磺酰氟(PMSF)、N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)、碘乙酸(IAc)、溴乙酸(BrAc)、三硝基苯磺酸(TNBS)、琥珀酸酐(SUAN)、对氯汞苯甲酸(PCMB)、二巯基苏糖醇(DTT)、N-乙酰咪唑(NAI)、乙酰丙酮(BD)、氯胺-T等种11化学修饰剂选择修饰凝血酶的多种氨基酸残基,并测定其酶活力变化。结果表明DTT修饰剂抑制效果最明显,PMSF、TNBS、SUAN、IAc、BrAc、氯胺-T修饰剂也有显著抑制酶的活力,NBS、BD、PCMB对酶活有一定的影响,NAI则没有影响。兔凝血酶的必需基团可能有丝氨酸、组氨酸、赖氨酸e-氨基和甲硫氨酸甲硫基以及对酶活性有严重影响的二硫键。