具ACE抑制活性的益生乳酸菌的筛选与特性研究

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血管紧张素转换酶(AngiotensinConvertingEnzyme,ACE)在肾素-血管紧张素RAS系统和激肽-激肽释放酶KKS系统中起着重要的调节作用。血管紧张素转换酶抑制剂(AngiotensinConvertingEnzymeInhibitor,ACEI)可有效地抑制ACE酶的活性,从而保持生物体的血压稳定。利用乳酸菌在生长过程中的蛋白质代谢,可以发酵产生ACE抑制肽,达到降血压的目的。乳酸菌发酵生产ACE抑制肽为ACE抑制肽的生物合成提供了另一种有效的途径。 本文以我国传统发酵食品四川豆豉巴、朝鲜族泡菜、朝鲜族豆酱、西藏灵菇和新疆酸奶子中的微生物为目标菌群,应用SL和MRS培养基、ACEI紫外分光光度检测法和模拟胃肠消化分析、耐酸耐胆汁益生实验,从中筛选出具有血管紧张素转换酶抑制活性的益生乳酸菌CZ2112。采用自发性高血压大鼠(SHR),将CZ2112发酵产物进行SHR的灌胃,应用尾动脉间接测压法检测24h内SHR的SAP变化,经验证该发酵产物有一定的降血压作用,且不产生明显的抑制心率作用。经API细菌学鉴定系统和16SrDNA鉴定,CZ2112为乳酸菌属植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。对比卡托普利的ACEI,植物乳杆菌CZ2112发酵形成的ACE抑制肽的抑制类型为非竞争性抑制。 测定了CZ2112菌株的最高、最低和最适生长温度分别为52℃、17℃和35℃。最高、最低和最适起始生长pH为9.5、3.8和6.0。测定CZ2112菌株在MRS和RSM培养基中的生长曲线。CZ2112菌株在MRS中4h进入对数生长期,12h进入稳定期,生长很旺盛;而在RSM中,生长比较缓慢,产酸能力很弱。CZ2112的蛋白水解活性在发酵初期增长速度很快,18h达到峰值,即OPA指数为0.58,蛋白水解活性随培养时间缓慢下降并在菌体的稳定期后期维持在一个水平,即OPA指数在0.35左右。CZ2112发酵产物的ACE抑制率随菌体生长速率的增减而增减,在32h达到抑制活性的最大值即稳定期后期出现最高抑制率81.5%。CZ2112开始生长后的8h内显示出两个自溶行为的高峰,一个是发生在由迟滞期向对数生长期的过渡期,另一个是发生在由对数生长期向稳定期的过渡期。 药敏实验结果表明,CZ2112对四环素、红霉素、氨苄青霉素、青霉素四种抗生素不敏感;对氯霉素、链霉素、庆大霉素、氟派酸、头孢他啶、氧哌嗪青霉素六种抗生素敏感。 通过比较不同金属离子对CZ2112发酵产物ACE抑制率的影响,发现K+、Na+、Cu2+、Fe2+对ACE抑制率几乎无影响,Mn2+、Mg2+对ACE抑制率有抑制,Ca2+对ACE抑制率有明显的促进作用。比较蛋白浓度固形物含量、接种量、NaCl浓度、CaCl2浓度、Tween-80对CZ2112发酵产物ACE抑制率的影响。经SAS软件分析,得到接种量、Tween-80、CaCl2添加量对发酵产物抑制率的影响最显著。最终确定固形物含量为10%,NaCl添加量为0.9%,CaCl2添加量为0.37mM,发酵时的接种量为4%,Tween-80添加量为0.45mL,此时ACE抑制率达到87.2%。
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