【摘 要】
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精液冷冻技术可以将优质精子长期储存,可极大提升公畜的利用率。但是,目前绵羊精液的冷冻效果仍然不尽人意。由于绵羊精子抗冻性差,在冷冻过程中易受到冰晶的损害而导致精液质量较低。为了改善绵羊精子冷冻-解冻后质量,本研究比较了不同的冷冻保护剂以及冷冻程序对绵羊精液冷冻保存的效果,在此基础上进一步探究了附睾尾液对绵羊精液冷冻保存的影响。结果如下:1、比较了不同精子密度（1、2、3、4、5亿个/ml）、降温速
【基金项目】
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国家重点研发计划“绵羊新品种新品系培育及良繁--绵羊高效育种与繁殖关键技术研发”（2021YFD1300901）；
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精液冷冻技术可以将优质精子长期储存,可极大提升公畜的利用率。但是,目前绵羊精液的冷冻效果仍然不尽人意。由于绵羊精子抗冻性差,在冷冻过程中易受到冰晶的损害而导致精液质量较低。为了改善绵羊精子冷冻-解冻后质量,本研究比较了不同的冷冻保护剂以及冷冻程序对绵羊精液冷冻保存的效果,在此基础上进一步探究了附睾尾液对绵羊精液冷冻保存的影响。结果如下:1、比较了不同精子密度（1、2、3、4、5亿个/ml）、降温速度（0.14、0.12、0.1、0.09℃/min）、4℃平衡时间（1、2、3h）以及不同冷冻保护剂（卵黄、大豆卵磷脂以及两者联合添加）的冷冻保存效果。结果表明:精子密度为3亿个/ml、降温速度为0.1℃/min、4℃平衡2h解冻后效果最佳。通过对卵黄与大豆卵磷脂以及二者联合添加效果进行比较,结果显示各组间无显著差异（P＞0.05）。综上所述选用基础卵黄稀释液,精子密度3亿个/ml、降温速度0.1℃/min、4℃平衡2h为绵羊精液冷冻的较适条件,使用所优化的冷冻程序冷冻解冻绵羊精子后活力可达到60.77±0.8。2、在冷冻稀释液中添加含有不同蛋白浓度（0,140、280、420μg/ml）的附睾尾液（Cauda Epididymal Fluid,CEF）,绵羊精液冷冻-解冻后,检测精子活力、精子运动参数、精子的结构完整率以及精子在37℃环境下存活时间等指标。结果表明:解冻后280μg/ml附睾尾液组的精子活力可达到73.4±1.26,极显著高于对照组（59.4±0.9,P＜0.05）。280μg/ml附睾尾液组精子的平均路径速度,直线运动速度,曲线运动速度分别为56.22±2.35,50.2±1.77和76.94±5.06,均极显著高于对照组（分别为43.88±1.72,38.36±1.17和63.29±3.45,P＜0.01）。精子质膜完整率、顶体完整率（分别为55.52±0.51,63.49±1.42）也显著高于对照组（分别为36.98±0.88,51.76±1.49,P＜0.05）。线粒体膜电位检测结果显示,冷冻稀释液中添加280μg/ml附睾尾液组精子的线粒体膜电位最高,与其他组差异显著（P＜0.05）。280μg/ml附睾尾液组的精子冷冻解冻后在37℃环境下可存活约14 h,而对照组仅能存活约10h。3、附睾尾液对绵羊精子抗氧化能力的影响。绵羊精液冷冻解冻后,对精子多种抗氧化酶活性进行测定,还检测了精子细胞内活性氧水平以及丙二醛含量。结果表明:在冷冻稀释液中添加280μg/ml蛋白浓度的附睾尾液,可显著提高绵羊精子冷冻解冻后的过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽过氧化物酶的活性（P＜0.05）,显著增强精子的总抗氧化能力（P＜0.05）,显著降低精子细胞内活性氧水平与丙二醛含量（P＜0.05）。综上所述,在绵羊精液冷冻稀释液中添加蛋白浓度为280μg/ml的附睾尾液可以提高精子抗氧化能力并改善精子冷冻解冻后的质量。通过以上研究,为绵羊精液冷冻保存提供可参考数据。
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