论文部分内容阅读
目的:探讨白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）/转录激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3,STAT3）与脂肪酸结合蛋白5（Fatty acid binding protein5,FABP5）调控耐紫杉醇（Paclitaxel,PTX）转移性乳腺癌细胞中的脂滴聚集和耐药分子机制方法:1.利用PTX药物浓度（1、6、12nmol/l）处理人转移性乳腺癌细胞SKBR3和小鼠转移性乳腺癌细胞4T1并维持6个月加以诱导,使细胞获得稳定的耐药性,并长期以10nmol/l PTX维持细胞的耐药性,构建稳定PTX耐药株（SKBR3R、4T1R）并进行耐药株的鉴定。2.CCK8试剂盒（cell counting Kit-8,CCK8）检测耐PTX转移性乳腺癌细胞（SKBR3R、4T1R）的细胞活力。3.蛋白印迹（Western blot,WB）检测蛋白表达水平（P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）、IL-6、磷酸化STAT3（Phospho-Tyr705-STAT3,P-stat3（Tyr705））、STAT3、FABP5）。4.利用癌症治疗反应基因特征（Cancer Treatment Response Gene signature Data Base,CTR-DB）数据库在线分析乳腺癌组织样本中IL-6在化疗敏感组和化疗耐药组的表达及上调差异基因KEGG通路富集分析。5.用基因特异性的小干扰核糖核酸（small interfeing RNA,si RNA）沉默IL-6、STAT3、FABP5基因的表达。6.油红O染色实验检测沉默IL-6、STAT3、FABP5后SKBR3R和4T1R细胞的脂滴聚集情况。7.CCK8实验、划痕实验和Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术实验分别检测沉默IL-6、STAT3、FABP5后SKBR3R和4T1R细胞的细胞活力、划痕愈合能力和诱导细胞凋亡程度。8.利用JASPAR数据库预测STAT3与FABP5的结合位点;9.利用基因表达谱交互分析II（Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA II）数据库在线分析IL-6与FABP5基因表达间的相关性;结果:1.耐药标志蛋白P-gp在乳腺癌亲本细胞（SKBR3、4T1）中低表达但在耐PTX转移性乳腺癌细胞（SKBR3R、4T1R）中显著高表达（P＜0.05）;CCK8结果表明,与乳腺癌亲本细胞（SKBR3、4T1）相比,PTX对耐PTX转移性乳腺癌细胞（SKBR3R、4T1R）的细胞活力抑制作用显著减弱,说明SKBR3R和4T1R细胞具有PTX耐药性;2.油红O染色实验表明,SKBR3R、4T1R细胞比亲本细胞脂滴聚集明显增多（P＜0.05）;3.利用CTR-DB数据库在线分析结果表明,与乳腺癌化疗敏感组相比,在乳腺癌化疗耐药组IL-6的表达显著上调;上调差异基因KEGG通路富集分析显示乳腺癌化疗耐药组脂肪酸合成通路显著富集;4.与亲本细胞（SKBR3、4T1）相比,IL-6、P-stat3（Tyr705）在SKBR3R、4T1R细胞表达显著增加。沉默IL-6、STAT3能有效抑制SKBR3R和4T1R细胞的细胞活力、划痕愈合能力并且诱导细胞凋亡,同时能增强PTX对SKBR3R和4T1R细胞的细胞活力和划痕愈合能力的抑制作用,及抑制SKBR3R和4T1R细胞的脂滴聚集（P＜0.05）;5.沉默IL-6表达抑制P-stat3（Tyr705）表达水平（P＜0.001）,即抑制STAT3活力;6.GEPIA II数据库分析结果表明,在乳腺癌中IL-6表达与FABP5表达呈正相关（P＜0.0001）;7.JASPAR数据库分析结果显示STAT3在FABP5启动子相对于+1核苷酸位置-355～-345上存在潜在的结合位点;8.在耐PTX转移性乳腺癌细胞（SKBR3R、4T1R）中沉默IL-6或STAT3表达均能够显著下调FABP5的表达（P＜0.001）;9.与亲本细胞相比,FABP5在SKBR3R、4T1R细胞表达显著增加（P＜0.001）。沉默FABP5能有效抑制抑制SKBR3R和4T1R细胞的脂滴聚集,以及抑制SKBR3R和4T1R细胞的细胞活力、划痕愈合能力和诱导细胞凋亡,并增强PTX对SKBR3R和4T1R细胞的细胞活力和划痕愈合能力的抑制作用。结论:紫杉醇诱导的压力改变转移性乳腺癌细胞脂滴聚集,通过上调IL-6激活转录因子STAT3,激活的STAT3促进FABP5表达,促进脂滴聚集。脂滴可为乳腺癌细胞提供生存物质和能量,由此促进转移性乳腺癌细胞发展耐药性。