骨唾液酸蛋白(Bonesialoprotein,简称BSP)是一种主要存在于骨中的非胶原蛋白，它具有RGD序列和聚谷氨酸富集区等特殊结构。BSP的多种生物功能与骨代谢疾病和肿瘤特异骨转移等相关。检测BSP在肿瘤组织中的表达变化，可预测肿瘤骨转移的可能性。血清BSP水平可作为骨质疏松症等骨分解代谢相关疾病诊断和疗效的评价指标。 BSP单克隆抗体是检测BSP的有力工具。由于进口的BSP抗体价格昂贵，限制了国内对BSP应用的深入研究。制备BSP抗体需要BSP抗原，但目前尚无纯化的天然BSP出售。目前获得BSP有两种途径，即直接从骨中提取或利用基因工程技术进行重组BSP的制备。2003年该实验室实现了重组人BSP在毕赤酵母的分泌表达。基于前期工作基础，该文应用Ni-NTA亲和纯化技术从毕赤酵母发酵液中制备rhBSP并免疫BALB/c小鼠；取脾细胞与SP2/0细胞融合，筛选杂交瘤并制备人BSP单克隆抗体，进行抗体的鉴定和初步应用研究。主要研究结果如下： 1.发酵上清中的rhBSP超滤浓缩后经Ni-NTA琼脂糖亲和层析，过SephadexG-25柱脱盐后，rhBSP浓度为0.9mg/mL，纯度在98％以上，蛋白回收率为72％。 2.rhBSP免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0融合，经HAT培养基筛选，得到融合细胞的克隆，亚克隆获得分泌BSP抗体的AHB1和AHB5杂交瘤细胞株。 3.AHB1为IgG2a型抗体，AHB5为IgG1型抗体；都含κ轻链，分子量约为150KDa；其中AHB1效价为10-3，AHB5效价达10-8；AHB5对rhBSP检测灵敏度为5ng/mL,特异性较高。 4.AHB5对正常组织和临床病理确诊的乳腺癌、前列腺癌组织进行免疫组化分析。结果显示正常骨组织BSP表达呈阳性；而心肌、肝、肾、胰腺和肌肉组织BSP表达为阴性。乳腺癌、前列腺癌组织和具备特异骨转移性质的乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO的BSP表达均为阳性。结果初步提示所制备的人BSP单克隆抗体AHB5具备良好的组织亲和特异性。