荧光原位杂交技术分析胚胎染色体异常的研究

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目的:使用荧光原位杂交方法(fluorescent in situ hybridization, FISH)筛查胚胎的18、X、Y染色体的非整倍体(aneuploidy)发生率,并分析胚胎染色体异常的影响因素。建立适合本生殖中心的准确、快速的植入前遗传学诊断的方法。方法:经患者知情同意签字后,收集2010.8~2011.2在天津医科大学总医院妇产科生殖中心治疗的34对夫妇获取的生长迟滞的72枚胚胎和2007.6~2009.12冻存的12对夫妇的40枚正常胚胎。将所有样本按照受精方式、年龄、超促排卵方案、Gn用量和Gn天数等分组。采用化学法去除透明带行卵裂球活检,HCl/Tween-20+甲醇/冰醋酸法裂解固定卵裂球,固定后采用CSP18/CSPX/CSPY三组染色体特异性DNA探针进行FISH检测。选取2010.6~2010.12唐氏综合征(Down syndrome, DS)血清学筛查高风险的20例孕妇羊水细胞作对照研究。结果:胚胎活检成功率为91.96%,固定成功率为86.48%,杂交成功率为89.82%。3种染色体探针可以筛查出多倍体、单倍体和嵌合体等染色体异常情况。生长迟滞的胚胎与正常冻存胚胎相比染色体异常率无明显差异(43.33% vs35.90%,P>0.05),其中嵌合率也无明显统计学差异(21.66% vs 28.21%, P> 0.05)。IVF组与ICSI组之间胚胎染色体异常率无统计学差异(38.71% vs 43.24%,P>0.05),嵌合率无统计学差异(17.74% vs 27.03%,P>0.05)。≥35岁组与<35岁组胚胎染色体异常率之间无统计学差异(55.17% vs 34.28%,P>0.05);嵌合率统计学差异明显(41.38% vs 17.14%, P<0.05)。GnRH-a短方案与GnRH-a长方案胚胎异常率相比无统计学差异(36.17% vs 44.23%,P>0.05);嵌合率也无统计学差异(21.28% vs 26.92%, P>0.05)。Gn用量≥24支组与Gn用量<24支组相比染色体异常率统计学差异明显(53.33% vs 35.29%,P<0.05);嵌合率并无统计学差异(31.11%vs 18.52%,P>0.05)。Gn使用天数≥9d组与Gn使用天数<9d组染色体异常率无统计学差异(43.86% vs 35.71%,P>0.05),嵌合率也无统计学差异(21.05% vs 28.57%,P>0.05)。结论:FISH是一种研究人类植入前胚胎特定染色体非整倍体的行之有效的方法。FISH技术特异性强,杂交信号容易判读,结果比较准确,可以在24h内得出结果,不影响胚胎的植入。正常冷冻胚胎复苏后与生长迟缓或停滞胚胎的染色体非整倍体率无差别,推测胚胎在冷冻和复苏过程可能使胚胎染色体造成畸变,但是仍需扩大样本量进一步证实。正常受精胚胎中有一部分胚胎是非整倍体,并有相当一部分是嵌合体,这些染色体异常胚胎可能是引起胚胎移植后着床率低、流产率高的重要原因之一。年龄增高、超促排卵中高Gn用量等影响胚胎非整倍体发生,因此建议对于高龄患者的胚胎在植入前行FISH筛查胚胎非整倍体,选取正常胚胎进行植入,以提高妊娠率和活产率,降低流产率。
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