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近年来,炎症与肿瘤的关系迅速成为研究领域的热点,大量临床和基础研究均表明,炎症与多种肿瘤的发生、发展有关。结肠炎相关结直肠癌(colitis-associated cancer,CAC)是一种与炎症性肠病(inflammation bowel disease,IBD)密切相关的结直肠癌,占IBD患者死因的15%,是其最严重的并发症。流行病学统计表明,IBD的发病率逐年上升,因此对其远期并发症的防治工作也变得尤为重要。CAC的形成经历了从炎症-异型增生-癌症的演变过程,在这一过程中涉及多种免疫细胞、炎症因子及其他免疫介质。这些炎症因子与免疫介质通过炎症反应及氧化应激共同作用于肠粘膜,引起多种基因发生突变,抑制细胞凋亡,促进细胞增殖、转移,从而促进肿瘤的发生、发展。然而,目前其促进结直肠肿瘤发生、发展的具体机制尚未明确。肿瘤坏死因子样配体1A(tumor necrosis factor ligand-related molecule1A,TL1A)是肿瘤坏死因子超家族成员,其受体包括死亡受体3(death receptor 3,DR3)和诱骗受体3(decoy receptor 3,Dc R3)。TL1A及其受体可通过影响肠黏膜免疫细胞,导致肠黏膜免疫系统耐受机制紊乱,诱导炎症介质产生,引发肠道炎症反应,从而参与IBD的发生。同时,在多种肿瘤中,TL1A可以通过调控促进内皮细胞凋亡、加重氧化应激反应和调控炎症通路活化从而影响肿瘤的进展。那么,作为IBD的重要调控因子,TL1A是否也影响结肠炎相关结直肠癌的发生、发展?为此,我们选用高表达TL1A的转基因小鼠和野生型鼠,建立CAC模型,以期从中得到答案。目的:建立AOM+DSS诱导的小鼠实验性结肠炎相关结直肠癌模型,初步探讨其在CAC过程中的作用。方法:(1)采用real-time Q-PCR方法进行LCK-CD2-TL1A-GFP基因型小鼠的鉴定与筛选;(2)通过氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)联合葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)建立实验性结肠炎相关结直肠癌模型,将Tg小鼠与C57BL/6 WT小鼠(8-12周)随机分为Control/WT组、AOM/WT组、DSS/WT组、AOM+DSS/WT组、Control/Tg组、AOM/Tg组、DSS/Tg组、AOM+DSS/Tg组,每组10只。AOM组在实验第一天接受单剂量10mg/Kg AOM腹腔注射后正常饮食,DSS组间断饮用2.5%DSS水,AOM+DSS组单剂量注射10mg/Kg AOM联合间断饮用2.5%DSS水。DSS组和AOM+DSS组小鼠饮用2.5%的DSS水7天后,改为饮用蒸馏水14天,此为一个造模循环,4个循环后造模结束;(3)结肠黏膜炎症程度评估包括疾病活动指数(Disease activity index,DAI)、结肠形态学变化和组织病理学评分;(4)肿瘤生成情况评估包括肿瘤的数目、直径、成瘤率,采用免疫组织化学染色、Western blot技术检测PCNA蛋白表达以明确细胞增殖情况;(5)进行组织病理学评分评估其异型增生程度;(6)结肠组织中炎症反应、异型增生及肿瘤直径的相关性分析。结果:(1)根据基因LCK-CD2-TL1A-GFP序列测定小鼠DNA,Tg小鼠目的基因测定成像在192 bp位置,而WT小鼠基因测定成像,在192 bp位置未检测到目的基因,据此筛选鉴定Tg小鼠;(2)在两种小鼠中,与Control组相比,DSS组和AOM+DSS组小鼠体重明显减轻,DAI显著升高,结肠壁充血水肿、长度缩短,结肠组织病理切片可见大量炎症细胞浸润,黏膜上皮细胞损伤脱落,形成浅溃疡,病理组织学评分显著增加;Control组和AOM组的肠道改变均无明显差异;DSS/Tg组、AOM+DSS/Tg分别较DSS/WT组、AOM+DSS/WT组肠道炎症反应增强;(3)AOM+DSS组可见结肠多发结节、息肉样隆起,突向肠腔,多位于中远段。与WT小鼠比较,Tg小鼠瘤体数目增多(P<0.05)、直径增大(P<0.05),且成瘤率明显高于野生型鼠(88.9%vs 66.7%);根据细胞异型程度分级,AOM+DSS/Tg组小鼠肿瘤多为重度异型增生(60%),野生型小鼠重度异型增生所占比例(44.6%)。根据细胞异性增生程度评分,AOM+DSS/Tg组明显高于AOM+DSS/WT组(2.75±0.5 vs 1.70±0.8,P<0.05);(4)免疫组织化学检测技术、Western blot技术结果显示两种小鼠中,AOM+DSS组PCNA的水平明显高于其他各组(P<0.05),相对于AOM+DSS/WT组,AOM+DSS/Tg组PCNA水平升高更为明显(P<0.05);(5)结肠组织中炎症反应程度与异型增生、肿瘤直径及数目呈正相关(r=0.853,r=0.683,P<0.05),异型增生与肿瘤直径及数目呈正相关(r=0.727,P<0.05)。结论:1本实验利用AOM联合DSS成功建立了结肠炎相关结直肠癌动物模型;2 TL1A可能通过调控炎症反应促进结肠组织异型增生从而促进结肠炎相关结肠癌的发生、发展。