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目的:
探索将骨髓内皮祖细胞(BEPCs)向角膜内皮细胞诱导分化并移植的可行性,以期解决角膜内皮细胞来源缺乏的问题,为临床上角膜内皮失代偿疾病的治疗提供新的思路和实验依据。
方法:
1.从人骨髓中分离培养BEPCs并进行鉴定。
2.通过与人CECs共培养,将人BEPCs向CECs诱导分化,并从形态、功能、抗原标志进行鉴定。
3.将诱导的人BEPCs接种到猪角膜脱细胞基质(PCACM)上体外构建组织工程角膜后板层,并进行检测。
4.将体外构建的组织工程角膜后板层移植到去除后弹力层-内皮层的猫角膜内面,观察修复内皮缺损的效果。
结果:
1. 人BEPCs成多边形,能摄取AcLDL,表达CD133、CD34和Flk-1抗原标志,并表达VIII型胶原。
2.通过诱导,人BEPCs形态上与CECs相似,并初步建立屏障功能和泵功能,表达神经烯醇化酶;CECs分泌的细胞因子在BEPCs的分化中起着重要作用。
3.将诱导的BEPCs接种到PCACM上能形成细胞单层,细胞与材料贴合良好,形成角膜后板层。
4.将诱导的BEPCs与PCACM构建的植片植入猫角膜,1个月后角膜逐渐恢复透明。
结论:
1.BEPCs是代替CECs的理想的种子细胞。
2.CECs能诱导BEPCs建立屏障功能和泵功能,并发生表型转化。
3.诱导的BECPs与PCACM复合可以体外构建组织工程角膜后板层。
4.体外构建组织工程角膜后板层移植可以修复角膜内皮缺损。