猪附红细胞体PCR诊断方法的建立和小鼠动物模型的建立

来源 :延边大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huangxianhua007
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猪附红细胞体病是由寄生于猪红细胞或血浆中的猪附红细胞体(Mycoplasma Suis)引起猪的一种传染病。目前,很多国家的研究人员加深对该病关于病原学方面、流行病学方面、免疫学方面等的研究,但在防治方面还未发现有效的方法。因此通过建立猪附红细胞体动物感染模型,更加深入的了解该病,进而为猪附红细胞体病防治研究奠定基础。为建立猪附红细胞体的PCR诊断方法,本试验根据猪附红细胞体Eno基因序列,设计合成一对特异性引物,优化反应条件,构建了重组质粒,并进行了敏感性试验和特异性试验。结果显示,目的片段大小为170bp,与GenBank登录序列同源性为98%。敏感度可检测1.772ng/μL病原DNA;特异性试验结果:猪肺炎支原体、多杀性巴氏杆菌、弓形虫、猪链球菌、猪呼吸与繁殖综合征病毒样品均无交叉反应。为建立猪附红细胞体的小鼠动物模型,并研究病原感染特性。本研究分别设计了不同小鼠处理的人工感染试验、不同病原形式的感染试验、冻存病原感染试验、小鼠模型血液再感染小鼠试验。并通过对小鼠模型中的病原进行扫描电镜观察、SDS-PAGE抗原分析和特异基因片段序列测定,来鉴定小鼠模型感染的病原。结果显示:不同小鼠处理的人工感染试验中,昆明鼠切脾组、昆明未切脾组和BALB/C组小鼠均可感染猪附红细胞体,但昆明鼠切脾组小鼠感染情况优于昆明未切脾组和BALB/C组。不同病原形式的感染试验中,猪附红细胞体阳性血液样本和纯化的猪附红细胞体样本均可感染切脾小鼠,但猪附红细胞体阳性血液样本组小鼠感染情况优于猪附红细胞体纯化样本组小鼠。冻存病原感染试验中,冻存6个月的阳性血液样本和纯化的猪附红细胞体样本均可感染切脾小鼠,但两组的感染情况均不如未冻存的阳性血液组。小鼠模型血液再感染小鼠试验中,小鼠模型阳性血液样本可再次感染切脾小鼠,感染情况与猪阳性血液样本组没有明显差别。通过对切脾昆明种小鼠模型中的病原进行电镜观察、SDS-PAGE抗原分析和特异基因片段序列测定,结果与猪附红细胞体无差别。结果表明,本研究成功建立了猪附红细胞体感染小鼠模型,各种处理方式中以猪阳性血液感染切脾的昆明种小鼠的方式感染效果最优。PCR诊断方法的建立将为猪附红细胞体的检测提供更加方便的途径。小鼠动物模型的建立,将为猪附红细胞体的生物学特性、致病机理、抗原制备及疫苗研制等方面的研究奠定基础。
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