论文部分内容阅读
终末期肝病是由多种急慢性肝病导致的临床综合征。应用干细胞再生产生正常肝细胞代谢功能的“肝脏组织”,进行体外支持或体内植入,可以解决肝脏来源的疑难。脂肪间充质细胞(ADSCs)作为自体细胞移植的种子细胞在再生医学中发挥着重要作用。由于能在体外培养稳定扩增,并在体内和体外分化成为肝细胞,ADSCs可以作为自体干细胞治疗肝脏疾病的种子细胞。Caveolin-1(窖蛋白-1,Cav-1)是组成胞膜窖的主要功能蛋白。由于在脂滴和新生细胞膜的形成以及肝再生的能量供应中发挥着重要作用,因此是Cav-1肝再生所必需的蛋白。然而,Cav-1是否参与并影响ADSCs向肝细胞分化这一过程尚不明确。目的：本论文以人脂肪间充质干细胞为实验对象,利用生长因子联合诱导技术建立肝样细胞模型,通过检测干细胞向肝样细胞诱导过程中Cav-1蛋白的表达,初步探讨Cav-1在肝样细胞诱导分化过程中的作用及介导的相关信号途径,旨在了解干细胞向肝细胞诱导分化的机制。方法：1、分离、提取及培养人源脂肪间充质干细胞并鉴定其性质。2、通过HGF、bFGF、EGF和Dex联合诱导,免疫荧光及RT-PCR方法对诱导细胞进行鉴定。3、体外MR评估自合成SPIO作为干细胞移植的MR活体内示踪的安全性和有效性。4、Western Blot方法检测不同诱导时期肝样细胞中Cav-1、ER-a36及MAPK信号通路蛋白表达。结果：1、分离提取了hADSCs,通过性质的鉴定表明,提取的hADSCs较为原始,干性强,具有多项分化的能力。2、生长因子联合诱导建立了肝细胞样模型,发现随诱导时间的延长,干性基因Oct4、Nanog表达量逐渐减少；ALB、CYP1A1、HNF1A、HNFIB等基因表达量逐渐增多；AFP表达先增高再降低。说明干细胞向肝样细胞分化诱导成功。3、自合成SPIO对脂肪间充质干细胞标记,在25μg/mL浓度时细胞的增殖水平正常,且在MR检测上具有显著性差异。4、在]hADSCs肝样分化的过程中Cav-1蛋白和MAPK信号通路蛋白表达逐渐增高。Cav-1及ER-a36表达随诱导时间的延长显著增高,在诱导7day时MAPK信号通路被激活。结论：自脂肪组织内提取足够数量的脂肪间充质干细胞,并可在体外获得稳定、可持续的扩增,并具有多项分化的能力；MAPK信号通路介导了hADSCs向肝样细胞分化过程,且Cav-1在这一过程中起到关键性作用；自合成纳米磁性四氧化三铁可以作为脂肪间充质干细胞标记物。