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目的：研究比拉真藓提取物抗EV71效果，臻选合适敏感病毒株，以细胞示踪技术为筛选手段，对提取液进行分离与纯化，初步确定有效部位，再以体内病毒感染为辅助手段，联合酶联免疫吸附测定试验进行考察，探究比拉真藓有效部位对EV71的抑制效果及作用机制。
方法：首先采用蒸馏水回流提取法、乙醇回流提取法、乙酸乙酯回流提取法和甲醇冷浸法对比拉真藓进行提取，对比各提取液TI值大小，选取最佳提取方法；对各提取液进行病毒筛选：筛选现有病毒株[人类肠道病毒71型(EV71)、呼吸道合胞病毒（RSV）、单纯疱疹病毒（HSV-1）、甲型流感病毒（H1N1）]，以抗病毒指数(TI值)为考察指标，利用细胞病变法、噻唑蓝染色法等，确定比拉真藓抗病毒效果最佳病毒株；根据相似相溶原理，选择蒸馏水、体积分数为25%、50%、75%的乙醇作为洗脱剂，冲洗DM130、X-5型、AB-8型、D101型四种型号的大孔吸附树脂柱，通过体外细胞实验，确定采用何种洗脱剂，选择洗脱最佳的大孔吸附树脂；对比选择大孔树脂和硅胶柱试验，得到不同分离纯化部位，以TI值大小为指标，筛选出抗EV71有效部位；有效部位通过超滤，得到四种不同大小分子量超滤液，以TI值大小为指标，选择抗EV71效果最佳分子量段。通过理化鉴定、高效液相色谱，初步确定有效部位的物质范围；腹腔注射EV71，建立小鼠病毒模型，比拉真藓有效部位高、中、低三个给药剂量组进行药效学实验，观察小鼠体重、摄食量等指标的变化，然后对肺组织进行切片观察，以探究比拉真藓有效部位体内抗病毒效果。利用酶联免疫吸附测定实验，检测小鼠体内TNF-α、TNF-β、IFN-α、IL-4各因子浓度变化，探究比拉真藓有效部位对小鼠免疫调节作用。
结果：1、通过病毒筛选，比拉真藓抑制EV71效果最好，TI值为20.37。
2、DM130型大孔吸附树脂水1洗脱部位，对EV71抑制效果最佳，TI值为56.06。
3、硅胶柱分离提纯后的提纯液Q-1，抗EV71病毒效果最佳，测得TI值为124。
4、经超滤后分子量小于3KDa的超滤液C-4，抗病毒效果最好，TI指数为131，高于利巴韦林（TI=41.11）。
5、利用二极管阵列检测器全波长扫描，在335nm、268nm处均出现最大吸收，符合黄酮类图谱特征；理化鉴定Molish反应有紫色环产生，说明内含糖苷类物质，盐酸镁粉反应呈阳性，说明内含黄酮类物质，初步确定有效物质为，黄酮类或黄酮苷类。
6、体内抗病毒实验表明，小鼠腹腔注射病毒后，出现体重减轻，进食量减少，说明造模成功；解剖后，对比空白组，病毒模型组肺部颜色加深，且出现不同程度病变；病理切片实验表明，C-4能有效减少肺组织病变，减少因感染出现的炎性渗出。
7、酶联免疫吸附测定实验结果表明，有效部位超滤液可使，促炎性因子TNF减少，抗炎性因子IFN增加，提升小鼠免疫功能的良性因子IL-4升高。
结论：抗EV71效果最佳有效部位Q-1，TI值为124，经超滤后得（小于3KDa）C-4，TI值为131，理化鉴定法结合高效液相色谱法，证明有效物质为黄酮类或黄酮苷类，通过体内实验发现比拉真藓大剂量组可对EV71有效控制，大剂量组可以通过提高血清中TNF-α、TNF-β降低IFN-α、IL-2的含量，协同发挥抗EV71作用。
方法：首先采用蒸馏水回流提取法、乙醇回流提取法、乙酸乙酯回流提取法和甲醇冷浸法对比拉真藓进行提取，对比各提取液TI值大小，选取最佳提取方法；对各提取液进行病毒筛选：筛选现有病毒株[人类肠道病毒71型(EV71)、呼吸道合胞病毒（RSV）、单纯疱疹病毒（HSV-1）、甲型流感病毒（H1N1）]，以抗病毒指数(TI值)为考察指标，利用细胞病变法、噻唑蓝染色法等，确定比拉真藓抗病毒效果最佳病毒株；根据相似相溶原理，选择蒸馏水、体积分数为25%、50%、75%的乙醇作为洗脱剂，冲洗DM130、X-5型、AB-8型、D101型四种型号的大孔吸附树脂柱，通过体外细胞实验，确定采用何种洗脱剂，选择洗脱最佳的大孔吸附树脂；对比选择大孔树脂和硅胶柱试验，得到不同分离纯化部位，以TI值大小为指标，筛选出抗EV71有效部位；有效部位通过超滤，得到四种不同大小分子量超滤液，以TI值大小为指标，选择抗EV71效果最佳分子量段。通过理化鉴定、高效液相色谱，初步确定有效部位的物质范围；腹腔注射EV71，建立小鼠病毒模型，比拉真藓有效部位高、中、低三个给药剂量组进行药效学实验，观察小鼠体重、摄食量等指标的变化，然后对肺组织进行切片观察，以探究比拉真藓有效部位体内抗病毒效果。利用酶联免疫吸附测定实验，检测小鼠体内TNF-α、TNF-β、IFN-α、IL-4各因子浓度变化，探究比拉真藓有效部位对小鼠免疫调节作用。
结果：1、通过病毒筛选，比拉真藓抑制EV71效果最好，TI值为20.37。
2、DM130型大孔吸附树脂水1洗脱部位，对EV71抑制效果最佳，TI值为56.06。
3、硅胶柱分离提纯后的提纯液Q-1，抗EV71病毒效果最佳，测得TI值为124。
4、经超滤后分子量小于3KDa的超滤液C-4，抗病毒效果最好，TI指数为131，高于利巴韦林（TI=41.11）。
5、利用二极管阵列检测器全波长扫描，在335nm、268nm处均出现最大吸收，符合黄酮类图谱特征；理化鉴定Molish反应有紫色环产生，说明内含糖苷类物质，盐酸镁粉反应呈阳性，说明内含黄酮类物质，初步确定有效物质为，黄酮类或黄酮苷类。
6、体内抗病毒实验表明，小鼠腹腔注射病毒后，出现体重减轻，进食量减少，说明造模成功；解剖后，对比空白组，病毒模型组肺部颜色加深，且出现不同程度病变；病理切片实验表明，C-4能有效减少肺组织病变，减少因感染出现的炎性渗出。
7、酶联免疫吸附测定实验结果表明，有效部位超滤液可使，促炎性因子TNF减少，抗炎性因子IFN增加，提升小鼠免疫功能的良性因子IL-4升高。
结论：抗EV71效果最佳有效部位Q-1，TI值为124，经超滤后得（小于3KDa）C-4，TI值为131，理化鉴定法结合高效液相色谱法，证明有效物质为黄酮类或黄酮苷类，通过体内实验发现比拉真藓大剂量组可对EV71有效控制，大剂量组可以通过提高血清中TNF-α、TNF-β降低IFN-α、IL-2的含量，协同发挥抗EV71作用。