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目的扩张型心肌病(dilated cardiomyoPathy,DCM)为死亡率较高的一种疾病,目前尚未报道其有效的治疗措施。近些年研究的干细胞治疗技术为它带来了新的曙光。本研究试图通过5-aza诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞,并了解在该过程中Wnt/β-catenin信号通路是否参与分化过程的调控,旨在为临床充分利用来源丰富的BMSCs(bone marrowmesenchymal cells,BMSCs)移植治疗终末期扩张型心肌病提供有效的实验依据。方法：从200g左右的SD雄性大鼠股骨提取BMSCs,,利用贴壁培养方法,培养至P3代细胞后利用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)来检测细胞的表面抗原：主要选取CD29、CD34、CD45、CD105等四种表面抗原进行检测,从而达到鉴定骨髓间充质干细胞的目的。台盼蓝染色计数细胞活性。选择活性较好,纯度较高的细胞制成细胞悬液,随机均匀分成a组、b组、c组、d组,分别用0μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L的5-aza进行干预,2周后比较总体细胞水平的活性率及心肌细胞的百分比,从而确定诱导分化的最佳浓度。此后将P3代骨髓间充质干细胞随机分成2组,即实验组及对照组。实验组为A组需加入最佳诱导浓度的5-aza培养24h诱导分化,经处理后更换为不含5-aza的培养基继续培养4周,根据培养时间的不同分成四组,即为培养第1周末、第2周末、第3周末、第4周末的各组细胞,分别对应为A1、A2、A3、A4四组。对照组B组不添加5-aza,参照A组的分组方法分别分为B1、B2、B3、B4四组；对各组细胞进行如下操作：①记录不同时期细胞的生长状态及形态；②行免疫荧光检测心肌细胞中的特异性cTnT来鉴定心肌细胞,计数心肌细胞百分比；③采用蛋白印迹法(western blot, WB)检测各组cTnT及β-catenin蛋白表达量,比较各组蛋白表达的变化。结果：应用FCM检测显示贴壁法培养获取的P3代BMSCs高表达CD29、CD105(分别为93.37%、89.08%)；而极少的表达CD34、CD45(分别为0.89%、1.06%)。经台盼兰试验测定其整体活细胞百分率>95%；通过对P3代BMSCs分别加入浓度为0μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L的5-aza进行干预的a组、b组、c组、d组,2周后细胞的活性率及心肌细胞的百分率分别如下：①总细胞活性率：a组为94.2±7.4(%),b组为93.6士7.1(%),c组93.5士6.7(%),d组80.1±9.2(%),将各组数据行方差分析得出,a组、b组、c组各组细胞间总细胞活性率无明显差异,但与d组比较,P<0.05,有统计学意义。②心肌细胞百分比：a组、b组两组未见心肌细胞,心肌细胞百分比为0,c组心肌细胞百分率为3.33±0.58(%),4.33±0.58(%),将c组、d组行配对t检验得出,P>0.05,无统计学意义。综合分析得出：c组即经10μmol/L的5-aza处理可将BMSCs诱导分化为心肌细胞,总细胞活性率较高。由BMSC分化而来的心肌细胞经标记特异性cTnT蛋白的免疫荧光染色后,在显微镜下表现为染红色荧光的细胞,各组心肌细胞百分比分别为：A1组及B组所有组别细胞显镜下未见心肌细胞形成,百分比为0(%)；A2心肌细胞百分率为3.33±1.53(%)；A3组心肌细胞百分比为19.67±1.53(%),A4组为25.67±2.1(%)。将所得数据行方差分析得出A2、A3、A4各组间P<0.05,有统计学差异。western blot技术检测cTnT的表达结果,A2组(1.231±0.017)、A3组为(6.606±0.227)、A4为(8.511±0.392)明显高于B1(0.824±0.012)、B2(0.826±0.138)、B3(0.827±0.02)、B4(0.827±0.004),A1(0.819±0.062),A组、B组行配对t检验后得出,A2与B2、A3与B3、A4与B4,P<0.05,有统计学意义,A1与B1,P>0.05,无明显差异。A1、A2、A3、A4各组行方差分析,P<0.05,各组间存在差异；B组行方差分析则未见差异。免疫荧光与western blot检测cTnT结果是相一致的。各组细胞β-catenin蛋白的表达结果为：B组各组细胞β-catenin蛋白的表达检测不出。A组各组表达如下：A1(1.877±0.044)、A2(7.634±0.329)、A3(1.084±0.092)、A4(0.473±0.025),经方差分析得出各组之间差异有统计学意义。结论：1.全骨髓贴壁法培养可获得足量、可靠的BMSCs,其表达的表面抗原符合BMSCs的特征。2.5-aza可成功诱导BMSCs分化为心肌细胞,且10μmol/l的5-aza浓度为本实验的最佳浓度。3.BMSCs分化形成的心肌细胞表达的cTnT蛋白随时间延长而逐渐增加,分化形成的心肌细胞数量也随之增多。4.β-catenin与cTnT表达的存在时间差异,推测在Wnt/β-catenin信号通路中,β-catenin可能参与调控BMSCs分化为心肌细胞。