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背景与目的胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,化疗是胃癌尤其是进展期胃癌综合治疗中必不可少的组成部分。但由于胃癌对化疗药物有天然耐药性,研究者开展了多方面的研究,以提高药物的疗效,减轻药物对正常组织的毒性,如如何科学合理的联合用药、选择更优化的联合方式及给药途径,以及靶向治疗的研究等,并不断取得了新的进展。铂类是细胞周期非特异性抗癌药物,类似双功能烷化剂,DNA是其作用靶点;在低氯环境中解离,与DNA等生物大分子结合形成链内交联、链间交联、DNA-蛋白质分子间交联,从而使DNA链局部纽结或解旋,阻止DNA聚合酶推进,致使DNA复制、转录失败,造成肿瘤细胞死亡。自从发现顺铂具有抑制肿瘤细胞增长的活性以来,铂类药物在肿瘤化疗中的研究与临床应用取得了迅速的进展,现已成为目前临床上不可或缺的一线化疗药物。目前,国内常用的铂类药物有顺铂（cisplatin,DDP）、卡铂（carboplatin,CBP）和奥沙利铂（oxaliplatin,OXA）。顺铂严重的耳肾毒性使其临床剂量受到一定限制,从而影响疗效,为了开发高效低毒的新型铂类抗癌药物,研究者用1,2-二氨基环己烷（DACH）基团替代顺铂（CDDP）NH4的氨基则产生奥沙利铂。奥沙利铂作用机制与顺铂相似,抗肿瘤活性优于顺铂,对耐顺铂的肿瘤细胞亦有作用。奥沙利铂主要剂量限制性毒性是外周神经毒性,无耳肾毒性,与顺铂毒副作用不叠加,值得进一步研究探讨二者联合应用以起到增效减毒的临床疗效。目前铂类药物联合应用主要集中在顺铂、卡铂联合治疗胃癌、食管癌、肺癌、卵巢癌等;也有报道顺铂、奥沙利铂联合应用治疗卵巢癌、食管癌、贲门癌、生殖细胞肿瘤有协同作用,但涉及到顺铂、奥沙利铂静脉联合应用治疗胃癌的临床和基础研究很少。DDP、OXA、5-FU是临床胃癌化疗方案中的常用药物,PF方案是胃癌一线基础治疗方案,但是药物毒性限制了铂类临床大剂量应用。本研究以多种实验方法观察以DDP、OXA为主联合用药对胃癌细胞体外的抑瘤活性和诱导凋亡能力,以及联合用药价值,为开发高效低毒的临床化疗方案提供科学的实验依据。材料与方法:1.细胞:人胃癌细胞系BGC-823。2.实验药物:奥沙利铂（oxaliplatin,OXA）、顺铂（cis-dismine dichoroplatinum,DDP）、5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）。3.MTT比色法测定不同浓度的单药及联合用药处理后细胞的生长抑制率,并绘制生长曲线。4.流式细胞仪检测细胞的周期分布。5.免疫组化测定凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。6.统计学处理:采用SPSS13.0统计软件,数据用均数士标准差（（?）±s）表示,计量资料符合正态性,方差齐时多组间比较采用单因素方差分析（one-wayANOVA）,相同处理组前后的比较用配对t检验;P≤0.05具有显著性。结果:1.不同浓度的OXA单药作用48h后,胃癌细胞生长受到不同程度的抑制,所有实验组与对照组及不同浓度实验组之间OD值比较有显著差异（P＜0.05）。结果显示,OXA单药可有效抑制胃癌细胞的生长,呈剂量依赖性。2.不同浓度的OXA、DDP联合用药作用于胃癌细胞,所有实验组与对照组及各实验组之间OD值比较有显著差异（P＜0.05）。实验结果表明,OXA与DDP联合用药可有效抑制胃癌细胞的生长,呈剂量依赖性。OXA联合DDP作用胃癌细胞48h后对细胞生长抑制率较OXA单药组增高,OXA的IC50值下降。3.不同浓度的OXA、DDP、5-FU联合用药作用于胃癌细胞,所有实验组与对照组及各实验组之间OD值比较有显著差异（P＜0.05）。实验结果表明,OXA、DDP与5-FU联合用药可有效抑制胃癌细胞的生长,呈剂量依赖性。OXA、DDP联合5-FU作用胃癌细胞48h后对细胞生长抑制率较OXA单药组及OXA/DDP联合用药组增高（P＜0.05）,OXA的IC50值显著下降。4.根据MTT结果绘制OXA单药及联合用药对胃癌细胞BGC-823的生长曲线:不同浓度的OXA单药及联合用药作用胃癌细胞48h的体外生长抑制曲线表明,对胃癌细胞的抑制作用均呈剂量依赖性,在相同摩尔浓度下,对细胞生长的抑制作用由强到弱为OXA/DDP/5-FU＞OXA/DDP＞OXA。5.流式细胞仪检测OXA单药及联合用药对胃癌细胞BGC-823细胞周期变化:OXA单药处理细胞后,12,24,48h S期细胞为（21.40±0.46）%,（46.30±1.68）%,（64.93±0.68）%逐渐增加,表现为S期的阻滞。OXA、DDP联合处理细胞后,12,24,48h S期细胞为（31.67±0.72）%,（49.73±0,76）%,（81.80±0.96）%,G2/M期细胞逐渐减少,表现为S期的明显阻滞。OXA、DDP、5-FU联合处理细胞后,12,24小时S期细胞为（44.87±1.59）%,（58.60±0.85）%,表现为S期的明显阻滞,48h出现为S期的明显减少（37.73±0.71%）。6.免疫细胞化学法检测显示:OXA单药及联合用药作用胃癌细胞48h后,Bcl-2、Bax、Caspase-3阳性表达产物定位于胃癌细胞的胞浆内,呈棕黄色。6.1.Bcl-2的表达:药物作用48h后,OXA单药组Bcl-2蛋白阳性表达率为（52.46±2.07）%,较对照组（73.73±2.24）%有所降低（P＜0.01）;OXA/DDP组Bcl-2蛋白阳性表达率（37.44±2.42）%较对照组及OXA单药组显著降低（P＜0.01）;OXA/DDP/5-FU组Bcl-2蛋白阳性表达率（21.91±2.38）%较对照组及OXA单药组与OXA/DDP联合用药组显著降低（P＜0.01）。6.2.Bax的表达:药物作用48h后,OXA单药组Bax蛋白阳性表达率为（40.21±0.93）%,与对照组（19.91±0.70）%比较具有统计学差异（P＜0.01）;OXA/DDP组Bax蛋白阳性表达率（56.36±0.67）%较对照组及OXA单药组显著升高（P＜0.01）;OXA/DDP/5-FU组Bax蛋白阳性表达率（75.88±0.58）%较对照组、OXA单药组及OXA/DDP联合用药组显著升高（P＜0.01）。6.3.Caspase-3的蛋白表达:药物作用48h后,OXA单药组Caspase-3蛋白的表达阳性率为（22.20±1.18）%,稍高于对照组（9.45±1.63）%（P＜0.01）;OXA/DDP组Caspase-3蛋白表达阳性率（40.91±1.58）%显著高于对照组及OXA单药组（P＜0.01）;OXA/DDP/5-FU组Caspase-3蛋白表达阳性率（65.68±1.57）%显著高于对照组、OXA单药组及OXA/DDP联合用药组（P＜0.01）。结论:1.OXA、OXA/DDP、OXA/DDP/5-Fu均可抑制胃癌细胞BGC-823的生长并诱导细胞凋亡,其抑制作用在一定范围内呈剂量依赖性,联合作用时OXA的IC50值较单药组明显下降;2.OXA、OXA/DDP均将细胞周期阻滞于S期,OXA/DDP/5-Fu联合作用12h,24h出现S期强大阻滞,48h则表现为S期细胞的减少。3.OXA单药可下调Bcl-2的表达,上调Bax、Caspase-3蛋白的表达,主要通过线粒体途径诱导细胞凋亡,两药及三药联合时对凋亡蛋白的调节能力增强,诱导细胞凋亡机制与单药相同。