激素性儿童股骨头缺血坏死动物模型的建立及病因初探

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目的:建立糖皮质激素幼兔股骨头缺血坏死模型,观察糖皮质激素受体在股骨头组织中的表达,探讨儿童股骨头缺血坏死可能的发病原因。方法:选用2月龄的新西兰大白兔60只,雌雄各半,体重1.4-1.7kg。随机分为两组,激素注射组48只,臀肌注射糖皮质激素(7.5mg/kg),每周两次,共8周。对照组12只,臀肌注射等体积的生理盐水(0.3ml/kg),每周两次,共8周。于第一次注射后第2、4、6、8周行双髋关节X线正位片、CT扫描检查,于第一次注射后第2、4、6周末分别处死激素注射组实验动物4只、对照组实验动物2只,剩余实验动物于第一次注射后第8周末处死,分别取双侧股骨头软骨、软骨下骨质行组织病理学、透射电镜检查,免疫组织化学法检测糖皮质激素受体的表达并进行图像分析,Tunel技术检测骨细胞凋亡情况。根据是否发病将激素注射组分为激素注射发病组和激素注射未发病组(诊断采用日本骨坏死多中心协会提出的标准化股骨头非创伤性坏死的诊断标准),比较糖皮质激素受体在发病组与未发病组及对照组股骨头中表达的差异,观察不同时期、不同分组实验动物股骨头骨细胞凋亡的情况。结果:1.激素注射组48只,根据日本骨坏死多中心协会提出的标准化股骨头非创伤性坏死的诊断标准,7只实验动物被认定为股骨头缺血性坏死阳性,发生率22.58%(7/31)。2.影像学表现:激素注射组出现股骨头骨质密度均匀增高,骨纹理消失,股骨头骨骺变小,高度下降,髋关节间隙增宽。并随着用药时间的延长,上述症状逐渐加重。3.组织病理学表现:激素注射组出现骨小梁稀疏、变细,部分断裂,排列不规则。并随着用药时间的延长,上述症状逐渐加重,至第8周末,激素注射组骨小梁面积比与对照组比较,统计学差异较大(P<0.01);激素注射发病组出现骨陷窝中骨细胞核固缩、变形、边聚,空骨陷窝增多,而激素注射发病组实验动物健侧和激素注射未发病组及对照组双侧股骨头仅有少量骨陷窝空缺。至第8周末,激素注射发病组患侧骨陷窝空缺率与各组比较,统计学差异较大(P<0.01);其余各组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4.超微结构表现:软骨下骨质中骨细胞出现细胞皱缩,细胞膜不完整,部分细胞质中有脂滴,未见细胞器;核膜不完整,核膜分离,染色质浓缩、边聚。5.激素注射发病组实验动物患侧股骨头软骨均有糖皮质激素受体表达,且表达量较高,激素注射发病组实验动物健侧和激素注射未发病组及对照组双侧股骨头中糖皮质激素受体表达极低或不表达,激素注射发病组患侧股骨头软骨中糖皮质激素受体的表达与其余各组比较,统计学差异较大(P<0.01);其余各组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。6.激素注射发病组患侧股骨头软骨细胞、骨细胞均有明显凋亡现象;激素注射发病组实验动物健侧和激素注射未发病组及对照组双侧股骨头软骨细胞、骨细胞仅有少量凋亡。激素注射发病组患侧股骨头软骨细胞、骨细胞凋亡率与其余各组比较,统计学差异较大(P<0.01);其余各组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.单纯臀肌注射糖皮质激素可以导致幼兔股骨头缺血坏死的发生:2.糖皮质激素及其受体可能在幼兔股骨头缺血坏死的发生、发展过程中起作用;3.幼兔股骨头缺血坏死可能是股骨头软骨细胞、骨细胞凋亡所致。
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