人羊膜间充质干细胞的培养及鉴定与诱导

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aionkina
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人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)是具有干细胞特性的细胞。因其取材方便、来源广泛等优点,已成为各国研究组织工程学及细胞替代治疗的焦点。近年来国内外研究者将其作为替代细胞移植治疗各种疾病,而且取得了较好的临床效果。本文就hAMSCs的分离培养、生物学特性、分化潜能进行探索与实验。通过对含有间充质干细胞(MSCs)的羊膜在体外分离培养,鉴定与诱导,确定其是否稳定且实用,目的使其成为本次试验的初始细胞进而为下一个动物实验奠定基础。本实验通过建立稳定的羊膜间充质细胞培育体系,首先在无菌条件下培育出传代细胞,通过不同培养基向神经组织诱导,成骨细胞诱导,脂肪细胞诱导及向胰岛素细胞诱导的几个实验方法,通过研究人羊膜间充质于细胞的分化潜能,人羊膜间充质细胞的形态学,细胞增殖特性,细胞活力检测及免疫组化方法对细胞进行鉴定,结果表明:1.通过成功建立人羊膜间充质细胞培养体系,对人羊膜间充质原代细胞培养后,进行连续传代,发现从传六代细胞开始,逐渐出现衰老分化的细胞,细胞状态不佳,并经鉴定证实所培养的细胞为人羊膜间充质细胞,故选用传3-5代细胞作为我们的试验对象。2.对人羊膜间充质细胞是否具有干细胞特性进行了鉴定。鉴定结果提示人羊膜间充质细胞表达干细胞表面标志物SSEA一4,表达干细胞全能性相关基因0ct-4。说明实验获得了具有多向分化潜能的人羊膜间充质细胞。3.通过人羊膜间充质细胞体外分化潜能的实验结果可知:人羊膜间充质细胞可以被诱导分化成成熟的神经细胞、矿化结节的成骨细胞和脂滴生成的脂肪细胞及双硫腙染色的胰岛素样细胞。通过鉴定、诱导证实所培养的细胞具有典型的间充质细胞特征,并且其生长状态良好,适合作为下一步的实验研究。
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