海南微藻脂类抑菌活性测定和脂类相关基因的过量表达研究

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目前,自然界已被发现微藻5万多种。利用微藻取得高价值的活性物质是当前各国研究的热点之一。现阶段的研究多以海洋大型藻为研究材料,对于淡水微藻抗菌活性的相关研究较少。从微藻中筛选或分离出的抗菌活性物质包括酯类、酚类、萜类、多糖类、卤化物和含硫化合物等,微藻提取物对植物病原菌的抗菌活性研究也较少。本文以本实验室分离得到的20株海南淡水微藻为实验材料,主要开展了以下工作:1.使用7种溶剂提取其活性物质,并采用纸片法对9种常见病原真菌和细菌进行抑菌活性试验,同时提取有较好抑菌效果藻株的粗脂进行抑菌活性试验。结果表明:20株微藻中有7株微藻提取液对9种病原菌中的8种有一定的抑菌活性;乙醚作为溶剂的提取液抑菌效果最好,广谱性最强;粗脂-乙醚提取液的抑菌活性强于普通乙醚提取液;浸提3-5d的提取液抑菌效果最好;提取液对病原细菌的抑菌效果明显好于病原真菌。2.以莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)为基础研究对象,本文初步探索了脂类对于抑菌效果的影响,选择莱茵衣藻中与脂类合成相关磷脂酰甘油磷酸合成酶(Phosphatidylglycerophosphate synthase, CrPGP3)、CDP-甘油二酯合成酶(Phosphatidate cytidylyltransferase, CrCDS1)和酰基载体蛋白硫脂酶(Acyl-ACP thioesterase, CrFAT1),克隆这3个基因的全长序列,构建这三个基因的过量表达载体使微藻中的脂类能够过量表达。并构建了亚细胞定位载体,以及原核表达载体。结果显示:过量表达的转化子3个基因的mRNA表达丰度较对照组有很大的提高,对于植物病原菌的抑制效果有一定的提高。3.在提高微藻脂类物质的表达情况下,抑制植物病原菌的效果也有所提高,说明脂类物质对于病原菌有一定的抑制作用。通过实验初步验证了,部分微藻的粗提液对于植物病原菌有抑制作用,在其成分中脂类物质对于植物病原菌的抑制效果明显。这为以后通过改造微藻基因来生产新型的抗菌药提供了理论基础。
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