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羊水过少是常见的产科并发症之一,常引起胎儿窘迫、新生儿窒息、胎粪吸入综合征、胎儿畸形、肺发育不良、胎位异常等并发症。特发性羊水过少的病因及发病机制尚不清楚,目前尚缺乏针对性的治疗方法。
目的:
1.通过比较特发性羊水过少及羊水量正常产妇羊膜、绒毛膜、胎盘上AQP1、AQP9、VEGF及其受体mRNA表达的差异,探讨AQP1、AQP9、VEGF在不明原因羊水过少发病机制中的作用。
2.以低分子肝素干预体外培养人羊膜上皮WISH细胞,比较不同浓度低分子肝素作用不同时间后AQP1、AQP9、VEGF及其受体mRNA表达的差异,初步探讨肝素治疗特发性羊水过少的可能性及机制。
方法:
1.随机选取2008年10月1日至2009年10月1日,因不明原因羊水过少在我院行选择性剖宫产的晚期妊娠孕妇20例,随机选取同期羊水量正常的孕妇20例作为对照。实验组和对照组均为单胎妊娠,无妊娠合并症和其它并发症。剖宫产时无菌条件下收集胎盘、羊膜和绒毛膜组织。采用RT-PCR方法检测AQP1、AQP9、VEGF、Flt-1和KDR mRNA的表达情况。通过t检验和秩和检验进行统计分析比较两组之间羊膜、绒毛膜和胎盘上各目的基因表达的差异。
通过单因素方差分析比较各目的基因在羊膜、绒毛膜、胎盘上表达的差异,以及同组同种组织中VEGF各亚型表达的差异。
2.培养人羊膜上皮WISH细胞。随机分为实验组和对照组,实验组分为三组:低剂量组、中剂量组、高剂量组,在细胞培养液中加入低分子肝素钙(商品名:速碧林,葛兰素史克(天津)有限公司),使其终浓度分别为0.2IU/ml、2IU/ml和20IU/ml。各组分别在培养12小时、24小时和48小时取样,各组各时间点设6个平行样。采用RT-PCR方法检测AQP1、AQP9、VEGF、Flt-1和KDR mRNA的表达情况。通过重复测量设计的方差分析比较各组三个时间点WISH细胞上各目的基因表达的变化趋势。通过单因素方差分析比较同组同一时间点WISH细胞上VEGF各亚型表达的差异。
结果:
羊水过少及羊水量正常产妇羊膜、绒毛膜和胎盘上AQP1、AQP9、VEGF、及其受体mRNA的表达
(1)羊水过少组和羊水正常组羊膜、绒毛膜和胎盘上均有AQP1、AQP9、VEGF、Flt-1、KDR mRNA的表达,其中VEGF可检出三种亚型,即VEGF121、VEGF165、VEGF188。两组羊膜、绒毛膜以及胎盘上VEGF165的表达高于VEGF121、VEGF188,差异有统计学意义(P<0.05)。
(2)羊水过少组羊膜上AQP1 mRNA的相对表达量低于羊水量正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。
(3)羊水过少组绒毛膜和胎盘上VEGF121、VEGF165 mRNA以及绒毛膜上VEGF188 mRNA的相对表达量高于羊水量正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。各组织上其余目的基因在两组间表达差异无统计学意义(P>0.05)。
(4)羊水过少组羊膜上AQP1的表达低于绒毛膜和胎盘,差异有统计学意义;绒毛膜上VEGF188的表达高于羊膜和胎盘,差异有统计学意义(P<0.01),两组其余目的基因在各组织间的表达无差异(P>0.05)。
2.低分子肝素干预体外培养的人羊膜上皮WISH细胞后AQP1、AQP9、VEGF及其受体mRNA表达的差异
(1)各组细胞各时间点AQP1、VEGF165、VEGF188以及Flt-1 mRNA的相对表达量处理效应与时间效应的交互作用无统计学意义,处理主效应也无统计学意义,时间主效应有统计学意义。各组细胞三个时间点相邻两点间VEGF165、VEGF188、AQP1、Flt-1mRNA的相对表达量的差异有统计学意义(P<0.05),24小时时间点的表达量低于12小时及48小时(P<0.05)。
(2)各组细胞AQP9、VEGF121及KDR mRNA相对表达量的处理效应*时间效应、处理主效应和时间主效应均无统计学意义(P>0.05)。
(3)各组各时间点WISH细胞上VEGF165的表达高于VEGF121和VEGF188。差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:
(1)人羊膜、绒毛膜、胎盘上均可检测出AQP1-、AQP9、VEGF121、VEGF165、VEGF188、Flt-1、KDR mRNA的表达,VEGF-165的相对表达量高于VEGF121和VEGF188。
(2)羊水过少孕妇羊膜上AQP1表达低于羊水量正常者,绒毛膜和胎盘上VEGF121、VEGF165以及绒毛膜上VEGF188表达量高于羊水量正常组。
(3)人羊膜上皮WISH细胞上有AQP1、AQP9、VEGF121、VEGF165、VEGF188、Flt-1以及KDR mRNA的表达。VEGF165的表达高于VEGF121和VEGF188。
(4)肝素下调体外培养的人羊膜上皮WISH细胞AQP1、VEGF165、VEGF188以及Flt-1 mRNA的表达。