【摘 要】
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微小核糖核酸(microRNA,简称miRNA)是一类非编码小分子RNA,它能够调节生物体的生长、分化和发育等生命活动,并且miRNA在癌症和其他疾病中具有特异性表达的特点,是评价污染物
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微小核糖核酸(microRNA,简称miRNA)是一类非编码小分子RNA,它能够调节生物体的生长、分化和发育等生命活动,并且miRNA在癌症和其他疾病中具有特异性表达的特点,是评价污染物基因毒性的潜在生物指标,因此实现miRNA的定量检测有重要的意义。目前,miRNA的检测方法主要有Northern blotting法、实时荧光定量PCR法、微阵列芯片法等,但是这些方法准确度差、耗时长、操作繁琐、灵敏度低及重现性差。因此,急需建立操作简单,特异性好,灵敏度高的miRNA检测方法。本文基于石墨烯/纳米金复合物类过氧化氢酶的性质及肽核酸(Pentose Nucleic Acid,PNA)对该复合材料催化性能的调节作用,提出了一个简单的、非标记的比色传感方法,实现了miRNA的定量检测。由于π-π共轭作用,PNA探针可以吸附到石墨烯/纳米金复合物的表面,使复合物的催化活性受到抑制,导致过氧化氢酶底物分子TMB的氧化程度降低,体系的颜色变化不明显。而在不同浓度的目标miRNA存在下,PNA探针首先与目标miRNA杂交形成双链结构(PNA/miRNA),由于双链结构与石墨烯/纳米金复合物的作用力较弱,会离开复合物的表面,石墨烯/纳米金的类过氧化氢酶的活性逐渐恢复,体系颜色发生明显变化,通过反应前后颜色的变化,可以对体系中的目标miRNA进行定量分析。在最优条件下,该比色传感方法对miRNA-21的检测范围为10nM-0.98μM,检测限为3.2 nM,比已报道的非标记的miRNA比色传感方法的检测限更低,显示了较高的灵敏性;其标准偏差为3.7%(n=3),显示了良好的重现性;相同条件下,该传感方法对干扰miRNA (miRNA-125b、miRNA-29a)几乎没有响应,显示了良好的特异性识别能力。此外,该比色传感方法可以用于人体血清中miRNA的检测以及miRNA混合体系中目标物的检测。因此,该比色传感方法为miRNA的检测提供了一种新的思路,并有望应用于生物样品中目标miRNA的定量检测。
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