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猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）于1974年首次在猪肾细胞系中被发现，是已知最小的动物病毒，其基因组主要包含两个开放阅读框（Open reading frames，ORFs）：ORF1和ORF2，ORF1称为rep基因，编码病毒复制相关蛋白；ORF2称为cap基因，编码病毒免疫相关蛋白。PCV有2个种，PCV1对猪无致病性，PCV2是断奶仔猪多系统衰弱综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）的病原体，可以引起猪圆环病毒相关疾病（Porcine circovirus–associated diseases，PCVADs），其主要症状包括消瘦、肠炎、呼吸道症状、死亡率增加和繁殖失败，给全球养猪业带来巨大经济损失。可以通过用PCV2的cap基因替换非致病性PCV1的相应片段，构建出一种嵌合病毒（PCV1-2），其免疫后能够诱导机体产生针对PCV2Cap蛋白的特异性抗体，但同时又保留PCV1的非致病特性。PCV2分为3个主要的基因型，即PCV2a、PCV2b和PCV2c，一般认为PCV2b的毒力比PCV2a强，PCV2c则较少见。2003年以前，全球范围内主要流行基因型为PCV2a，之后伴随着PCVAD临床症状越来越严重，猪群中PCV2优势基因型逐渐变成了PCV2b。一般来说，基于PCV2b的疫苗比基于PCV2a型的在降低机体组织损伤和病毒血症方面更加有效。PCV有11个预测的开放阅读框（ORFs），ORF1与病毒复制相关，ORF2与病毒免疫原性相关，ORF3与细胞凋亡相关，其余ORFs功能尚不明确。基于以上背景，本研究期望构建出一种基于PCV2b基因型的嵌合型猪圆环病毒（PCV1-2b）并研究其增殖特性，建立出一种能够区分PCV不同种与基因型的PCR检测方法，以及对PCV2新转录产物及其功能进行初步研究。本研究获得以下结果：（1）在PK-15细胞上转染重组嵌合质粒PCV1-2b后，通过间接免疫荧光（IFA）、PCR、透射电镜（TEM）与Western blot共同确定嵌合型猪圆环病毒PCV1-2b构建成功。进一步研究表明所获嵌合病毒在PK-15细胞上的增殖效果比在猪肺泡巨噬细胞好；在6μmol/L NH4Cl刺激下，可使嵌合病毒在PK-15细胞上的增殖能力增强。（2）成功建立了可用于PCV1、PCV2a和PCV2b分型的三重PCR方法。该方法敏感性高、特异性好，与单PCR检测结果的符合率高。该方法对56份样品检测结果显示，PCV2a检出率1.78%，PCV2b检出率42.86%，说明PCV2b已经成为所检猪场的主要流行基因型。（3）成功扩增PCV2新转录产物ORF5与ORF6基因，并构建其真核表达载体GFP-ORF5与GFP-ORF6。这2个重组质粒转染PK-15细胞后，RT-PCR证明转染后ORF5与ORF6在mRNA水平已经表达，Western blot结果说明ORF6在蛋白水平已经表达。荧光定量PCR方法检测Bcl-2与Bax基因在mRNA水平的表达情况提示ORF6在PCV2感染PK-15细胞的过程中可能起到抑制细胞凋亡的作用。综上所述，本研究成功构建了嵌合型猪圆环病毒PCV1-2b，并对其增殖特性进行了初步研究，其在实际生产中可以作为一种新型疫苗来防治PMWS与PCVADs；同时建立了一种能够区分PCV不同种与基因型的三重PCR方法，能够同时区分PCV1、PCV2a与PCV2b，给临床中PCV2的分型检测提供了新的技术手段，从而使PCV2疫苗的使用更具针对性；本研究亦构建了PCV2新转录产物ORF5与ORF6的真核表达载体，并在过表达的基础上对其功能进行了初步研究，为进一步研究PCV2与宿主细胞的相互作用提供了新的思路。