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目的：1.测定六味地黄丸中丹皮酚、马钱苷、莫诺苷和芍药苷含量。2.提取和分离山茱萸中马钱苷和莫诺苷。3.建立灵敏度高、专属性强、高效稳定的HPLC-MS法,测定大鼠血浆中马钱苷、莫诺苷和芍药苷的浓度。4.进行健康大鼠单次灌胃莫诺苷粗品、马钱苷和莫诺苷混合物、六味地黄丸后马钱苷、莫诺苷、芍药苷的药代动力学研究,比较马钱苷和莫诺苷在不同组药代动力学差异。5.进行肾阴虚模型大鼠单次和多次灌胃六味地黄丸药动学和药效学研究。方法：1.采用HPLC-DAD法测定六味地黄丸中丹皮酚、马钱苷、莫诺苷和芍药苷含量。六味地黄丸经处理后,以乙腈(A)-0.15%磷酸(B)梯度洗脱,采用Agilent ZORBAX C18色谱柱(4.6×250mm,5μm)分离,流速1mL·min-1,DAD检测,波长238nm,柱温30℃；进样量10gL。2.称取山茱萸原药材400g,经浸泡、煎煮、滤过、浓缩,得山茱萸提取液约100mL；提取液结合AB-8大孔树脂柱富集苷类、硅胶柱层析分离纯化,采用HPLC-DAD法检测分离产物。3.血浆样品经乙酸乙酯提取、吹干、复溶后,以甲醇-0.02%甲酸(28：72,V／V)为流动相,采用Wondasil C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱分离,流速0.7mL·min-1；柱温30℃；进样量10μL；ESI离子源,负离子模式,雾化压力50 psi,干燥气(N2)流速9 L·min-1,干燥气温度为350℃,毛细管电压4000 V,单离子反应监测(SIM)方式,监测离子m／z 435.2(马钱苷)、m／z451.2(莫诺苷)、m／z525.2(芍药苷)和m／z327.1(内标),马钱苷、莫诺苷和内标碎片电压均为110V,芍药苷碎片电压为100V。4.18只健康雄性Wister大鼠,随机分为3组,即莫诺苷组、马钱苷和莫诺苷混合组、六味地黄丸组,分别灌胃给予莫诺苷粗品(20mg·kg-1,以莫诺苷计)、马钱苷和莫诺苷混合物(15 mg·kg-1和20mg·kg-1)、10 g·kg-1六昧地黄丸,留取血浆样本,采用HPLC-MS法检测马钱苷、莫诺苷和芍药苷的药物浓度。采用DAS2.0实用药代动力学程序非房室模型计算药代动力学参数,评价不同形式给药后马钱苷和莫诺苷健康大鼠药代动力学差异。5.12只健康雄性Wister大鼠随机分为两组,皮下注射氢化可的松注射液造模后,分别单次和多次灌胃给予六味地黄丸混悬液,留取血浆和血清样本,采用HPLC-MS法检测血浆马钱苷和莫诺苷药物浓度,采用全自动酶标仪测定血清中SOD和AKP值。采用DAS2.0实用药代动力学程序非房室模型计算药代动力学参数,分析药动学特征,并与药效学指标相结合分析。结果：1.HPLC-DAD法测定六味地黄丸中丹皮酚、马钱苷、莫诺苷和芍药苷的含量,丹皮酚、马钱苷、莫诺苷和芍药苷分别在0.5～20、0.25-10、0.5-20和O.15-6μg·mL-1范围内线性关系良好,且同一厂家不同批次六味地黄丸四种成分含量相对稳定。2.山茱萸经提取和分离后,通过HPLC-DAD测定,得浓度为71.7 mg·mL-1的莫诺苷粗品6.0mL,及马钱苷和莫诺苷(马钱苷72.5mg·mL-1,莫诺苷96.5 mg·mL-1)混合物7.0mL。3.HPLC-MS法测定大鼠血浆中马钱苷、莫诺苷和芍药苷的浓度,马钱苷、莫诺苷和芍药苷5-1000ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,回归方程分别为Y=0.0171X+0.0026,(r=0.99573),Y=0.0072X+0.0044, (r=0.99751), Y=0.0095X-0.0122,(r=0.99334).最低定量限均为5ng·mL-1,绝对回收率分别大于77%、69%和78%,相对回收率范围为85%-120%,批内变异均小于10%,批间变异均小于15%,马钱苷、莫诺苷和芍药苷在血浆中-20℃冷冻24小时和7天及反复冻融条件下稳定。4.马钱苷和莫诺苷在莫诺苷组、马钱苷和莫诺苷组药时曲线均呈单峰吸收；马钱苷和莫诺苷在六味地黄丸组,药时曲线呈双峰现象；在六味地黄丸大鼠血浆中未能检测到所有时间点的芍药苷浓度,因此未能进行药代动力学分析。用非房室模型计算药代动力学参数,莫诺苷在莫诺苷组、马钱苷和莫诺苷组、六味地黄丸组中主要药代动力学参数分别为MRT0-t(2.392±0.734)h、(2.768±0.819)h和(7.813±1.556)h,t1/2(1.485±0.624)h. (1.932±0.848)h和((7.71±5.756)h,Tmax(1.417±0.904)h.(1.375±0.44)h和(2.917±1.828)h,Cmax(423.12±52.641)ng·mL-1、(520.622±72.215)ng·mL-1和(336.162±69.765)ng·mL-1, AUC0-t(1267.791±326.319)ng·mL-1·h. (1610.961±550.065)ng·mL-1·h和(2622.371±864.174)ng·mL-1·h,AUC0～∞(1284.826±328.657) ng·mL-1·h.(1670.588±620.716)ng·mL-1·h和(46574.198±45140.607)ng·mL-1·h.马钱苷在马钱苷和莫诺苷组、六味地黄丸组中主要药代动力学参数分别为MRT0-t(2.599±1.037)h和(6.042±0.644)h,MRT0～∞(2.699±1.123)h和(7.033±1.03)h,t1／2(1.586±1.18)h和(4.398±1.6336)h,Tmax(1.458±0.401)h和(2.083±1.021)h,Cmax(658.597±85.48)ng·mL-1和(369.314±53.452)ng·mL-1,AUCo-24(1825.4±635.706)ng·mL-1·h和(2275.174±553.825)ng·mL-1·h,AUC0～∞(1832.324±643.67)ng·mL-1·h和(2343.478±601.313)ng·mL-1·h。对各组莫诺苷药代动力学参数进行统计学分析,除Tmax外,其他药代动力学参数六味地黄丸组与马钱苷和莫诺苷混合组和莫诺苷组均有统计学差异,但马钱苷和莫诺苷混合组与莫诺苷组药代动力参数均无统计学差异。马钱苷和莫诺苷混合组、六味地黄丸组中莫诺苷药代动力学参数MRT0-24、MRT～∞、t1／2、Tmax均比莫诺苷组滞后,AUC0-24、AUCo-明显增加。六味地黄丸组与马钱苷和莫诺苷组比较,马钱苷的药代动力学参数MRT0-24和MRT0～∞有统计学差异,其他参数虽然有增高趋势,但无统计学差异。本结果从药动学角度说明六味地黄丸组方配伍影响马钱苷和莫诺苷的吸收,进一步验证六味地黄丸组方配伍的合理性,为深入研究组方原理打下基础。5.莫诺苷在肾阴虚模型大鼠体内单次和多次给药后主要药动学参数分别为MRT0-24(8.337±0.848)h和(7.592±1.105)h,MRT0～∞(13.149±3.947)和(9.875±3.291)h,t1／2(8.728±2.282)h和(6.078±2.293)h,Tmax(2.167±0.408)h和(3.333±0.516)h,Cmax(287.013±58.389)ng·mL-1和(240.275±34.891)ng·mL-1,AUC0-24(2852.796±430.373)ng·mL-1·h和(2225.752±535.232)ng·mL-1·h,AUC0～∞(3311.084±349.092)ng·mL-1·h和(2463.095±694.01)ng·mL-1·h。马钱苷在肾阴虚模型大鼠体内单次和多次给药后主要药动学参数分别为MRT0-24(6.471±0.957)h和(7.246±1.732)h,MRT0～∞(8.257±2.852)h和(11.048±7.256)h,t1／2(4.852±1.772)h和(5.676±5.84)h,Tmax(2.5±2.145)h和(3.5±0.548)h,Cmax(287.607±24.486)ng·mL-1和(262.314±24.972)ng·mL-1, AUC0-24 (1956.656±130.427)ng·mL-1·h和(1638.489±196.911)ng·mL-1·h,AUC0～∞(2027.44±173.357) ng·mL-1·h和(2070.227±447.341)ng·mL-1·h.马钱苷和莫诺苷在大鼠体内单次和多次给药后药动学参数经统计学分析,均无统计学差异。可能原因一方面说明在体内无蓄积,另一方面给药间隔相对其半衰期较长有关。SOD和AKP测定结果表明六味地黄丸可升高SOD值、降低AKP值。多次给药比单次给药后血清SOD值大,但无统计学差异；多次给药比单次给药后血清AKP值小,具有统计学差异。结论：1.同一厂家六味地黄丸中四种成分含量相对稳定。2.从山茱萸中提取和分离莫诺苷粗品与马钱苷和莫诺苷混合物可满足药代动力学实验的要求。3.六味地黄丸中其他配伍药材促进马钱苷和莫诺苷在大鼠体内的吸收。健康大鼠单次灌胃后,莫诺苷药代动力学参数除Tmax外,其他参数六味地黄丸组与马钱苷和莫诺苷混合组和莫诺苷组均有统计学差异,AUC增加,t1/2延长。与混合组相比,六味地黄丸组马钱苷的药代动力学参数MRT0-24和MRT0～∞延长,有统计学差异。4.肾阴虚大鼠单次和多次灌胃六味地黄丸后,马钱苷和莫诺苷药动学参数均无统计学差异；血清AKP值有统计学差异。