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背景:在我国泌尿系统中,膀胱癌发病率和死亡率逐年上升,是最常见的恶性肿瘤。现如今经尿道膀胱肿瘤电切术以及根治性膀胱切除+尿流改道手术,术后辅以放、化疗等仍然是膀胱癌治疗的最重要、最有效的方法。但是即使经过手术,辅助放化疗,部分膀胱癌治疗效果依旧不理想,究其原因归结于膀胱癌的复发和转移。膀胱癌的复发和转移是导致患者死亡和治疗失败的主要原因,当前对膀胱癌发生发展的机制尚未十分清楚,故有必要研究其发病机制,寻找有效的治疗靶点。SPOCK1(Sparc/osteonectin cwcv and kazal-like domains proteoglycan 1)基因编码的细胞外基质糖蛋白,被证实与多种肿瘤细胞的增殖、黏附及转移密切相关。在肿瘤细胞中SPOCK1基因过表达能够促进肿瘤细胞侵袭转移;反之,沉默SPOCK1的表达可使肿瘤细胞丧失其转移能力。在膀胱癌组织中,已发现SPOCK1基因存在高表达,并且SPOCK1高表达与尿路上皮癌预后差有关。通过在膀胱癌细胞中降低SPOCK1基因,观察其侵袭和增殖的改变,了解SPOCK1基因对膀胱癌发生发展的影响,从而为膀胱癌机制研究提供实验理论依据。目的:1、验证在膀胱癌细胞中SPOCK1基因的表达情况。2、通过体外细胞实验进一步研究SPOCK1基因对膀胱癌细胞侵袭和增殖的影响。方法:1、q RT-PCR和Western Blot方法检测人输尿管上皮永生化细胞(SV-HUC-1),膀胱癌细胞株5637以及膀胱癌细胞株T24中目的基因SPOCK1的表达情况。2、构建SPOCK1小干扰RNA片段(si RNA),采用脂质体介导转染至膀胱癌细胞株5637中。我们将实验分组为空白对照组(Control cells group)、无义序列组(Scrambled si RNA group)和实验组(SPOCK1 si RNA group)。通过q RT-PCR检测各组SPOCK1m RNA相对表达量情况,Western Blot方法检测转染后SPOCK1蛋白的变化,筛选最佳干扰序列。3、使用RNAi技术下调膀胱癌细胞株5637中SPOCK1基因的表达,分别使用划痕实验,Transwell法和CCK-8法检测降低SPOCK1基因的表达后膀胱癌细胞侵袭和增殖能力的改变情况。结果:1、q RT-PCR和Western Blot方法检测结果表明,SPOCK1基因相关m RNA和蛋白在膀胱癌细胞系中存在过表达现象,并且在膀胱癌细胞株5637中表达较膀胱癌细胞株T24更高。2、同其它的干扰序列相比,SPOCK1-si RNA-2序列干扰效果最好(P<0.05)。3、使用RNAi技术下调膀胱癌细胞株5637中SPOCK1基因表达,通过划痕实验,Transwell法和CCK-8法检测发现膀胱癌细胞侵袭和增殖能力明显受到抑制。结论:1、SPOCK1基因在膀胱癌细胞中存在高表达。2、SPOCK1基因的高表达促进了膀胱癌细胞的侵袭和增殖能力,其可能成为膀胱癌基因治疗的候选靶点。